[发明专利]一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，该方法具体包括步骤如下：

（1）红细胞裂解

在容积为2ml离心管中加入450-500μl红细胞裂解液，将120-150μl完全解冻后的全血样本加入上述离心管中，充分振荡，混匀至细胞碎片均匀悬浮，未见成团聚集，将裂解液×10,000rmp离心1-3min，除去上清液；

（2）白细胞裂解及DNA吸附

将蛋白酶K原液倍比稀释，吸取20μl蛋白酶K及120-150μlLysisBuffer加入以上离心管中，并反复吹打混匀3次后65℃孵育，振荡2-3min静止5-8min，振荡与静止交替进行3个循环；加入250-300μl的BindingBuffer和20-30μl的MagneticBeads置离心管中，抽打混匀或振荡混匀3min；室温离心管架放置3min；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；

（3）DNA纯化

将上述离心管从磁力架上取下，加入600-800μl的Wash1Buffer，抽打混匀或振荡混匀至磁珠悬浮，未见成团成片；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；将离心管从磁力架上取下，加入600-800μl的Wash2Buffer，抽打混匀或振荡混匀至磁珠悬浮，未见成团成片；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；将离心管从磁力架上取下，加入500-600μl的ddH₂O，抽打混匀或振荡混匀至磁珠悬浮，未见成团成片；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；将离心管放置磁力架上，室温晾干10～15min；

（4）DNA洗脱

将上述室温晾干后的离心管从磁力架上取下，加入80～100μl的ElutionBuffer，抽打混匀或振荡混匀，置于65℃，孵育8min；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时得到DNA溶液，并将DNA溶液转移至收集管中，并-20℃或-80℃保存。

2.根据权利要求1所述的基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，所述的红细胞裂解液加入量为480μl。

3.根据权利要求1或2所述的基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，所述的完全解冻后的全血样本加入量为130μl。

4.根据权利要求1或2所述的基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，所述的Wash1Buffer加入量为700μl。

5.根据权利要求4所述的基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，所述的Wash2Buffer加入量为700μl。

6.根据权利要求5所述的基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，所述的ddH₂O加入量为550μl。