[发明专利]一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法

摘要

一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法，首选扩增得到ELF4基因片段，与pET28a载体连接，获得重组表达菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4；用诱导物IPTG诱导该重组表达菌株，获得融合蛋白；向纯化的融合蛋白中加入终浓度为0.05%的β‑丙内酯，将处理后的蛋白与疫苗佐剂ISA71 VG混合后，采用所得混合物对蛋鸡进行免疫，从蛋鸡所下鸡蛋中提取收集卵黄抗体，即制备出猪ELF4蛋白卵黄抗体。本发明方法相对简单，抗体产量大，制备成本低，所得到的种猪ELF4蛋白卵黄抗体效价高，适合工业化生产。

主权项

1.一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、以猪肾PK15细胞系细胞为材料，提取总RNA为模板，采用RT‑PCR法扩增得到猪ELF4基因片段，将扩增得到猪ELF4基因片段与pET28a载体连接并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞，获得重组表达菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4；所述猪ELF4基因核苷酸序列列如SEQ ID No.1所示；步骤二、用诱导物IPTG诱导重组菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4表达目的蛋白，收集菌体，获得表达目的蛋白的重组表达菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4；步骤三、从表达目的蛋白的重组表达菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4中分离纯化得到目的蛋白；所得目的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；步骤四、向目的蛋白中加入终浓度为0.05%的β‑丙内酯，先置于4℃下 24‑48 h，再置于 37℃下2h，将目的蛋白中的外源污染微生物灭活，得到处理后的蛋白；步骤五、将处理后的蛋白与疫苗佐剂ISA71 VG以体积比3:7的比例混合后，得到混合物A；采用所得混合物A对蛋鸡进行免疫，抽取第3次免疫后7天至30天的鸡蛋采用Western blot方法检测ELF4特异性卵黄抗体效价，当抗体效价达到16000倍以上时，从鸡蛋中提取收集卵黄抗体，即制备出猪ELF4蛋白卵黄抗体。