[发明专利]一种用于制备中分子量右旋糖酐菌种的筛选方法

摘要

本发明公开了一种用于制备中分子量右旋糖酐菌种的筛选方法，属于右旋糖酐领域。本发明利用葡萄皮上本身微生物进行培养，将培养后的微生物用a-氨基异丁酸在X射线仪照射下改性，改性后过滤得菌体悬浊液，将菌体悬浊液涂抹在生物素制得的培养基上培养，培养过程中加入6-苄基氨基嘌呤乙醇溶液，将培养得到的菌丝接种至筛选培养基中培养、筛分，最后收集菌种即可，本发明利用葡萄皮上自带的微生物进行改性、培养、筛选，工艺简单，成本低，筛选得到的菌种不仅活性高、稳定性好，而且利用其降解右旋糖酐，可得到分子量分布均匀的中分子量右旋糖酐，右旋糖酐的质量和品质好，降解过程条件温和，能耗少。

主权项

一种用于制备中分子量右旋糖酐菌种的筛选方法，其特征在于具体筛选步骤为：（1）称取葡萄皮，使用蒸馏水将其冲洗干净，按重量份数计，取30～40份清洗后的葡萄皮、15～20份琼脂、8～12份牛肉膏及6～9份蛋白胨，搅拌均匀，使用质量分数为3％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0～7.2，再将混合物倒入发酵罐中，设定温度为30～35℃，空气通气量（V/V·min）为0.6～0.9；（2）待发酵20～23h后去除发酵液，收集发酵物，按固液比1:2，将发酵物与质量分数为0.8％a‑氨基异丁酸溶液混合均匀，使用X射线仪照射20～30min后，倒入混合机中在200r/min下搅拌20～30min，搅拌后进行减压过滤，收集过滤液，得悬浊液，备用；（3）按重量份数计，取30～40份酵母浸膏、10～15份琼脂、8～12份蛋白胨、8～16份蔗糖及4～8份生物素搅拌均匀后，使用质量分数为5％氢氧化钠溶液调节pH至7.5～8.0，再将其放入高压灭菌锅中进行灭菌，得培养基；（4）使用涂布棒将步骤（2）所得的悬浊液涂布在上述所得的培养基上，再将培养基移至摇床培养箱中，在25～28℃，150rpm下，培养6～9天，在培养过程中每隔10～12h，向培养基中加入生物素质量5～10％质量分数为2％的6‑苄基氨基嘌呤乙醇溶液；（5）按重量份数计，取30～35份葡聚糖T2000、15～20份质量分数为10％的硝酸钠溶液、1～2份磷酸二氢钾、1～2份磷酸氢二钾、0.1～0.4份七水硫酸亚铁及0.2～0.3份硫酸铜，搅拌均匀，使用高压灭菌锅对其进行灭菌消毒，得筛选培养基，使用接种棒将上述培养结束后培养基上的菌丝接种至筛选培养基中，再将其移至摇床培养箱中，在25～28℃，110rpm下，培养4～6天，收集筛选培养基上存活的菌种，即可得到用于制备中分子量右旋糖酐菌种。