[发明专利]一种利用ApoE-/-小鼠建立非酒精性脂肪肝模型的方法

摘要

本发明涉及非酒精性脂肪肝病动物模型的建立，具体为伴有严重血脂异常的一类高脂诱导的非酒精性脂肪肝动物模型的建立。选用SPF级雄性AopE‑/‑小鼠和C57BL/6小鼠，按照鼠种随机分模型组和对照组，共4组，每组8只，所有小鼠用普通维持饲料适应性喂养1周后，模型组给予高脂饲料，对照组给予对照饲料，10周后取血处死，检测常规血脂四项及肝功能；取鲜活肝组织匀浆，测定组织内胆固醇与甘油三酯含量；另取肝组织做石蜡、冰冻切片，分别进行H.E.和油红O染色，判定NAFLD模型效果与质量。本发明使用单纯性高脂高热量饮食造模，在很短的周期10周内造出重度NAFLD模型，模型血脂、肝脏脂肪等指标稳定性极好，可重复性高，为NAFLD高质量模型的建立提供了一种可靠的方法。

主权项

一种利用ApoE‑/‑小鼠建立非酒精性脂肪肝模型的方法，期特征在于，建立模型的步骤为：1)、选取鼠种：分别选取SPF级雄性AopE‑/‑小鼠，6～8周龄，体重22±2g，SPF级雄性C57BL/6小鼠，6～8周龄，体重22±2g，饲养于本部屏障环境内，温度22～25℃，湿度50％，12小时昼夜交替，适应性喂养1周；2)、分组与造模：经适应性喂养1周后，随机分四组，其中AopE‑/‑小鼠两组，命名为对照组B和高脂组D，C57BL/6小鼠两组，命名为对照组A和高脂组C，每组8只；造模10周，期间对照组喂食对照饲料，高脂组喂食高脂饲料，早晚各一次定量定投饲料，保证40g/笼，每笼4只小鼠，自由引水，水源为SPF级的灭菌水，每两周称量体重一次；3)、采血与检测：造模10周后，各组小鼠同一时间全部处死，处死前禁食12小时，4％水合氯醛腹腔注射麻醉，摘眼球取血后，全血37℃静置1小时，4℃放置血块析出，3000rmp离心10min取上层血清，全自动生化分析仪检测血清中的TC、TG、LDL‑c、HDL‑c、AST和ALT指标；4)、肝脏脂质的检测：各组以一只小鼠为例，分别各取100mg新鲜肝组织根据试剂盒自带裂解液各加1ml进行匀浆，各自匀浆液一部分用来检测甘油三酯TG和总胆固醇TC的含量，另一部分分别测定其蛋白含量，最后必须用每毫克蛋白浓度来校正甘油三酯TG和总胆固醇TC；5)、肝脏组织病理学的检测：各组以一只小鼠为例，取肝脏同一部位，分两份，一部分用Bouin’s固定液固定，用作石蜡切片进行H.E.染色，另一部分用4％多聚甲醛固定液固定，用作冰冻切片进行油红O染色；6)、对步骤3)—步骤5)进行分析，确定利用ApoE‑/‑小鼠经高脂诱导成功建立了伴有严重血脂异常的非酒精性脂肪肝NAFLD动物模型。