[发明专利]一种血管生成模型的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种建立新型的血管生成的模型的方法，包括如下步骤：1）血管内皮细胞接种于基质胶上初步成血管网；2）Ⅰ型胶原加入激发二次血管生成；该制备方法适用于模拟关节滑膜组织中血管生成的病理发生过程，尤其适合模拟构建人类颞下颌关节滑膜组织中血管生成的情况，以及为研究新的细胞因子在促进或抑制血管生成方面的作用机制提供新的平台。该模型制造材料简单，耗时少，具有良好的开发拓展和组织工程应用前景。

主权项

一种构建血管生成模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)血管内皮细胞的培养；(2)基质胶血管生成模型的构建：血管内皮细胞接种于孔板中凝胶态的基质胶上，使用相差显微镜于不同时间点进行观察拍照，确定毛细血管网状结构形成完善，即血管网状结构的节点最多时的时间点；(3)Ⅰ型胶原加入激发二次血管生成：当血管内皮细胞接种于基质胶上，使用相差显微镜观察到毛细血管网状结构形成完善时，吸弃原血管内皮细胞专用培养基将已中和的液态的Ⅰ型胶原加入到基质胶与血管内皮细胞上，随即放入37℃恒温细胞培养箱中20分钟，此时液态的Ⅰ型胶原已完全转变为凝胶态，再在胶原表面加入含10％胎牛血清的RPMI‑1640培养基，并将孔板放入含有95％空气和5％CO₂的37℃恒温细胞培养箱中；使用相差显微镜于不同时间点进行观察，随着Ⅰ型胶原的加入，血管内皮细胞去分化现象被抑制，转而呈现出细胞增殖、迁移现象，血管内皮细胞从已形成的血管网中以出芽的方式迁移出来，纤细的血管支随时间推移变得粗壮，相互对立而未接通的两血管支随时间推移而接通吻合，此现象至血管内皮细胞接种48小时后仍未停止，至此血管生成模型建立。