[发明专利]BudAB基因过表达的产酸克雷伯氏菌基因工程菌株的构建方法及其发酵方法在审
| 申请号： | 201610157879.X | 申请日： | 2016-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN105695499A | 公开（公告）日： | 2016-06-22 |
| 发明（设计）人： | 葛菁萍;孙姗姗;孙雯;宋刚;修宝林;平文祥 | 申请（专利权）人： | 黑龙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/20;C12P7/18;C12R1/22 |
| 代理公司： | 哈尔滨市文洋专利代理事务所(普通合伙) 23210 | 代理人： | 何强 |
| 地址： | 150080 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | BudAB基因过表达的产酸克雷伯氏菌基因工程菌株的构建方法及其发酵方法，涉及一种BudAB基因过表达的基因工程菌株的构建方法及其发酵方法。是为了解决现有产酸克雷伯氏菌2,3-丁二醇产量低的问题。构建方法：一、构建克隆载体pMD18-T-BudA和pMD18-T-BudB；二、构建重组过表达质粒pR1SW-budB和pRSFDuet-1-BudAB；三、将pRSFDuet-1-BudAB转化K.oxytoca HD79感受态细胞，即得到重组菌株Klebsiella oxytoca HD79-budAB。发酵方法：一、将重组菌株接种到种子培养基中，30℃，150r/min培养至对数生长期，得种子液；二、将种子液接种到发酵培养基中，于30℃，150r/min发酵。本发明用于生产2,3-丁二醇。 | ||
| 搜索关键词： | budab 基因 表达 产酸克雷伯氏菌 基因工程 菌株 构建 方法 及其 发酵 | ||
【主权项】：
BudAB基因过表达的产酸克雷伯氏菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、从产酸克雷伯氏菌HD79中分别扩增BudA基因和BudB基因，构建克隆载体pMD18‑T‑BudA和pMD18‑T‑BudB；二、以表达质粒pRSFDuet‑1为骨架，向质粒上的多克隆位点插入目的基因budB，构建重组过表达质粒pR1SW‑budB，以pR1SW‑budB为骨架，插入目的基因budA构建重组过表达质粒pRSFDuet‑1‑BudAB；三、将重组过表达质粒pRSFDuet‑1‑BudAB电转化K.oxytoca HD79感受态细胞，即得到重组菌株Klebsiella oxytoca HD79‑budAB。
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