[发明专利]一种胎儿染色体文库构建的试剂盒、方法及其应用

摘要

本发明涉及无创产前筛查检测领域，具体涉及一种胎儿染色体文库构建的试剂盒、方法及其应用，所述试剂盒包括：用于DNA提取的试剂和用于DNA文库构建的试剂。本发明制备的胎儿染色体文库构建的试剂盒，相比于目前国内外市场上的其他游离DNA文库构建试剂盒，能直接对孕妇血浆进行游离DNA提取，进行测序文库构建，可以完整系统性的实现样本游离DNA的提取和文库构建，可用于高通量无创筛查胎儿染色体是否为非整倍体，操作方便、简单、快速，检测结果高效、准确，灵敏度高，具有重要价值。

主权项

1.一种用于非疾病诊断的构建胎儿染色体高通量测序文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)提取待测样本的DNA，具体如下：(1)取300‑500μL待测样品，加入300‑600μL游离DNA提取试剂，45‑65℃，水浴保温5‑20min，所述游离DNA提取试剂包括：0.02‑0.2M Tris‑HCl缓冲液、100‑500μg/mL蛋白酶K、0.01‑0.1M EDTA和0.05‑0.3％Triton‑100；(2)加入300‑600μL游离DNA沉淀试剂，室温孵育1‑10min后转移至离心柱中，所述游离DNA沉淀试剂为有机溶剂；(3)离心弃废液，加入300‑600μL游离DNA漂洗试剂，离心弃废液，重复该步骤一次，所述游离DNA漂洗试剂包括：0.02‑0.2M Tris‑HCl缓冲液、2‑10M异硫氰酸胍和0.4‑3M NaCl；(4)取出离心柱，转移至干净的收集管中，打开离心柱管盖，室温晾干1‑10min；(5)加入10‑100μL超纯水至离心柱中，离心收集游离DNA；2)将步骤1)得到的DNA进行PCR构建高通量测序文库，具体如下：(1’)取5‑50ng提取的游离DNA，加入1‑30μLDNA末端修复试剂进行末端修复，得到修复后DNA；(2’)加入8‑35μL连接修复DNA接头，与修复后DNA进行连接；(3’)按体积比1：(0.3‑5)的比例加入磁珠悬浮液，充分混匀1‑10min后置于磁力架上，待溶液澄清后，弃上清液；(4’)加入10‑50μL的超纯水，放置磁力架上，溶液澄清后，取上清液转移至干净的EP管中；(5’)加入15‑60μL PCR扩增引物，进行PCR扩增，按体积比1：(0.3‑5)的比例加入磁珠悬浮液纯化，得到最终的高通量测序文库；其中，所述PCR扩增引物包括通用引物和index引物，所述通用物的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.1所示，所述index引物的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.2‑13所示。