[发明专利]一种具备增殖能力的自体表皮细胞APG凝胶的制作方法

摘要

本发明公开了一种具备增殖能力的自体表皮细胞APG凝胶的制作方法，包括以下步骤：上层血浆、PRP的制取；催化剂的制取；表皮细胞悬液的制取；通过三腔喷枪将上层血浆、PRP、催化剂、表皮细胞悬液同时对着皮肤缺损创面喷洒。其有益效果是：操作简单、使用方便、效果明显。

主权项

一种具备增殖能力的自体表皮细胞APG凝胶的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：抽取患者的外周静脉血，置于1号离心试管中；步骤2：将步骤1中1号离心试管中的外周静脉血在离心速率为800×g以下离心4min,然后在离心速率为529×g以下再一次离心4min；步骤3：通过巴氏管吸取步骤2中离心后1号离心试管中的上部血浆及靠近界面1mm的RBC转移至2号离心试管中；步骤4：将步骤3中的2号离心试管中的RBC在离心速率为854*g下离心6min；步骤5：用巴氏管吸取步骤4中离心后2号离心试管中的上层血浆，并置于3号离心试管内备用；步骤6：将步骤5中2号离心试管静置30min后振摇，让剩余的红细胞和血小板重悬于剩余的血浆中，即制得PRP；将制备好的PRP放入三腔喷枪的1号管中；步骤7：催化剂的制取：取lml 10％的氯化钙溶液与IO00U凝血酶按照lml：200u混合，然后放入三腔喷枪的2号管中；步骤8：无菌条件下取口腔粘膜2cm×1cm，将所述口腔粘膜用PBS漂洗，去除皮下组织，剪成0．2cm×0．2cm小块，加Dipase I溶液，4℃消化24小时；步骤9：用尖镊从消化过夜后的口腔粘膜小块中分离出表皮细胞，经过PBS漂洗，然后剪碎加入0．25％胰蛋白酶和0．01％EDTA 的混合液，37℃消化lOmin，最后加入血清终止消化；步骤10：用吸管反复吹打步骤9中终止消化后的表皮细胞，再用100目的尼龙筛网过滤去除没有完全消化的细胞膜片，离心弃上清液，加入含有15％胎牛血清、表皮生长因子lOug／L的MEM培养液，然后置于37℃、5％饱和湿度的恒温培养箱中培养，隔日换液1次；步骤11：当步骤10中恒温培养箱中培养的细胞密度达60％~70％时，再次经离心洗涤2次，用血细胞计数板将表皮细胞浓度调整为7×10e／ml，即制得表皮细胞悬液；步骤12：将步骤5中3号离心试管内的上层血浆和步骤11的表皮细胞悬液置入三腔喷枪中的3号管中；步骤13：将三腔喷枪的1、2、3号管内的物品同时对着皮肤缺损创面喷洒。