[发明专利]一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法

摘要

本发明提供了一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法。首先确定花药中小孢子处于单核靠边期后,采集雄穗经消毒，用普通豆浆机粉碎。在超净工作台内分别以40目和60目网筛过筛,除去大于和小于花药的杂质，快速获得大量无菌花药。花药接种于在MS+40mg/L蔗糖+2.0mg/L 2,4‑D+0.5mg/L KT条件下培养4周获得的愈伤组织最好；该愈伤组织在MS+30mg/L蔗糖+2.0mg/L BA+0.5mg/L KT分化培养条件下分化的不定芽最多；不定芽在WPM+0.4mg/L IBA+0.2mg/L NAA培养基中诱导生根。将根尖取下用饱和对二氯苯预处理4h后，经染色制片，光学显微镜观察到染色体收缩效果最佳且分散。获得3个染色体数为14的单倍体株系。

主权项

一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法,其特征在于:以小孢子处于单核靠边期的无菌花药为外植体，通过诱导愈伤组织、诱导分化不定芽、不定芽生根过程，获得花粉再生植株，然后利用根尖染色体制片技术，鉴定再生植株染色体倍数，获得染色体数为14条的单倍体植株；所述内含单核靠边期小孢子无菌花药的快速获得方法为：于8月下旬到9月初期间，不断取材，利用醋酸洋红法于光学显微镜下观察小孢子的发育时期，确定花药中小孢子处于单核靠边期后,采集雄穗，在超净工作台内用70％酒精消毒3分钟，无菌水冲洗后，用灭菌滤纸吸干水分，事先将普通豆浆机的杯和刀片在超净工作台内用70％酒精消好毒，然后将雄穗放于杯内，拧好刀片，拿出超净工作台，插到电机上进行粉碎，之后在超净工作台内将粉碎物取出，分别以40目和60目网筛过筛,除去大于和小于花药的杂质，快速获得大量无菌花药用于接种；所述的获得花粉再生植株的方法为：花药接种于在MS+40mg/L蔗糖+2.0mg/L 2,4‑D+0.5mg/L KT条件下培养4周获得愈伤组织；该愈伤组织在MS+30mg/L蔗糖+2.0mg/L BA+0.5mg/L KT分化培养条件下分化不定芽；不定芽在WPM+0.4mg/L IBA+0.2mg/L NAA培养基中诱导生根，形成再生植株；所述的再生植株根尖染色体制片技术为:将上述诱导的根尖取下，用饱和对二氯苯预处理4h后，经染色制片，经光学显微镜观察到染色体收缩效果最佳、且分散。