[发明专利]一种固定化脂肪酶催化合成绿原酸植物甾醇酯的方法

摘要

本发明公开了一种固定化脂肪酶催化合成绿原酸植物甾醇酯的方法，属于植物甾醇酯领域。本发明先从玉米中通过酶解、超临界CO₂萃取等工艺得植物甾醇，再从菊花中提取出绿原酸，以固定化脂肪酶为催化剂，将植物甾醇和绿原酸进行酯化反应，得植物甾醇酯，最后纯化即可，本发明采用生物酶法催化条件温和、反应选择性高，而且克服了游离植物甾醇在水和油脂中溶解性差和活性低的问题。

主权项

一种固定化脂肪酶催化合成绿原酸植物甾醇酯的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）选取200～300g干燥后的玉米，将其研磨，过100～120目筛得玉米粉末，将玉米粉末加入5L反应釜中，并向反应釜中加入总质量5～8%复合酶，再按固液比1:10～1:15加入质量浓度15%盐酸溶液，混合搅拌均匀，将反应釜升温至45～60℃，进行酶解3～5h，将酶解液过滤取滤渣，所述的复合酶是按质量比3:2的纤维素酶和蛋白质酶进行混合；（2）将上述得到的滤渣用榨汁机榨出多余水分，将榨完后的滤渣用超临界CO₂在室温下进行萃取，萃取压力为5～20MPa，二氧化碳流量为160～180kg/h，萃取1～2h后，从流体相中分离得到甾醇固体，留取，备用；（3）取50～60g菊花花瓣，先粉碎过60～80目筛，再将粉末置于300～500mL质量分数85%乙醇溶液中，搅拌后移入超声提取装置中，在60～65℃和80～120W下进行提取2～3h，得提取液，将提取液在4000～5000r/min转速下离心分离，取上清液，将上清液移入圆底烧瓶中，用旋转蒸发仪在50～55℃下蒸发浓缩至乙醇完全去除，将浓缩液转移到分液漏斗中，按体积比1：2加入石油醚进行脱色2～3次，分层得水相，再用乙酸乙酯萃取3～5次，取下层液体，即为绿原酸；（4）取2～3g步骤（2）的甾醇于250mL锥形瓶中，按固液1:2～1:6向瓶中加入上述绿原酸，搅拌混合后再加入总质量4～10%固定化脂肪酶为催化剂、0.1～0.3g二十六烷为内标和40～50mL甲醇为溶剂，将锥形瓶放入恒温振荡器中，在40～65℃和80～120r/min下进行酯化反应3～5h；（5）将上述酯化反应后的混合物按体积比1:5～1:8溶于正己烷中，用硅胶柱层析分离，分离后收集洗脱液，并在65～70℃进行旋转蒸发，得到绿原酸甾醇酯浓缩液，将浓缩液在45～55℃下干燥6～8h得到绿原酸甾醇酯粉末状固体。