[发明专利]一种四肽的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种四肽的制备方法及应用。该四肽的制备方法包括以下步骤：1）硝基精氨酸的制备；2）硝基精氨酸甲酯的制备；3）BocPro的制备；4）BocPro‑NO₂ArgOMe的制备；5）Pro‑NO₂ArgOMe的制备；6）BocGly的制备；7）BocGly‑Gln的制备；8）BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂ArgOMe的制备；9）BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg的制备；10）Gly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg的制备；11）四肽Gly‑Gln‑Pro‑Arg的制备。本发明的四肽可用于制备祛皱、抗炎、美容护肤品。本发明的合成路线具有路线短、产率高、节省时间的特点，合成过程中涉及到的所有原料均已商品化，价格廉价，技术难度小，工业化操作简单，具有良好的产业化前景。

主权项

1.一种四肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)硝基精氨酸的制备：将发烟硝酸和浓硫酸混合均匀，置于冰盐浴中，边搅拌边缓慢加入L‑精氨酸，搅拌反应2～3h，再加入浓氨水调节pH值至8～9，然后用冰醋酸调节pH值到6，将反应液置于冰箱中0～4℃保存4～6h，收集沉淀物，沉淀分别经水洗1～2h、95％的乙醇洗1～2h、抽滤、干燥，得到结构式如(1)所示的硝基精氨酸，所述L‑精氨酸、发烟硝酸的质量体积比为1g：(1.25～2)mL；所述发烟硝酸、浓硫酸的体积比为1：(0.4～1)；2)硝基精氨酸甲酯的制备：将步骤1)的硝基精氨酸溶于甲醇，加入DMF，置于冰盐浴中，滴加SOCl₂，滴加完后反应30～50min，然后慢慢升温至75～85℃，回流反应6～8h，反应液经减压蒸馏除去溶剂、乙醇结晶，得到结构式如(2)所示的硝基精氨酸甲酯，所述硝基精氨酸、甲醇的质量体积比为1g：(3～15)mL；所述硝基精氨酸、DMF的摩尔比为1：(0.01～0.05)；所述硝基精氨酸、SOCl₂的摩尔比为1：(1～1.6)；3)BocPro的制备：将脯氨酸溶于水，置于冰盐浴中，滴加NaOH溶液，再加入THF，再滴加含(Boc)₂O的THF溶液，滴加完后室温搅拌至反应完全，减压蒸馏除去THF，用石油醚萃取除去未反应的(Boc)₂O，再置于冰盐浴中用柠檬酸溶液调节pH值至2～3，析出沉淀，抽滤，得白色固体，滤液用乙酸乙酯萃取3～5次，萃取液经饱和氯化钠洗涤、无水Na₂SO₄干燥、减压蒸馏除去乙酸乙酯，得到结构式如(3)所示的BocPro，所述脯氨酸、水的质量体积比为1g：(50～80)mL；所述水、NaOH溶液、THF、含(Boc)₂O的THF溶液的体积比为6：(3～4)：(3～4)：(3～4)；所述NaOH溶液的物质的量浓度为1～3mol/L；所述脯氨酸、(Boc)₂O的摩尔比为1：(1.1～1.5)；4)BocPro‑NO₂ArgOMe的制备：将含BocPro、缩合剂的THF溶液置于冰盐浴中，加入脱水剂，恒温反应3～5h，将生成的沉淀过滤得滤液，再将含硝基精氨酸甲酯、三乙胺的DMF溶液慢慢加入到上述反应体系中，于室温搅拌反应过夜，减压蒸馏除去DMF和THF，加入碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯萃取5～6次，萃取液经饱和氯化钠溶液洗涤、硫酸钠干燥、减压蒸馏，得到结构式如(4)所示的BocPro‑NO₂ArgOMe，所述BocPro、缩合剂、脱水剂、硝基精氨酸甲酯、三乙胺的摩尔比为1：(1.1～1.4)：(1.1～1.3)：(1～1.2)：(1～1.2)；所述THF溶液、DMF溶液的体积比为(2～3)：1；所述缩合剂为N‑羟基琥珀酰亚胺、1‑羟基苯并三唑中的一种；所述脱水剂为碳化二亚胺类；5)Pro‑NO₂ArgOMe的制备：将BocPro‑NO₂ArgOMe溶于盐酸乙酸乙酯溶液，40～50℃反应过夜，过滤，干燥，得到结构式如(5)所示的Pro‑NO₂ArgOMe，所述BocPro‑NO₂ArgOMe、盐酸乙酸乙酯溶液的质量体积比为1g：(10～40)mL；所述盐酸乙酸乙酯溶液的物质的量浓度为2～4mol/L；6)BocGly的制备：将甘氨酸水溶液置于冰盐浴中，滴加NaOH溶液，加入THF，滴加(Boc)₂O的THF溶液，维持pH值为8～10，滴完后室温搅拌反应2～4h，减压蒸馏除去THF，再置于冰盐浴中用柠檬酸溶液调节pH至1～3，再用乙酸乙酯萃取3～4次，萃取液经饱和氯化钠洗涤、无水Na₂SO₄干燥、减压蒸馏，得到结构式如(6)所示的BocGly，所述甘氨酸水溶液中甘氨酸、水的质量体积比为1g：(15～30)mL；所述甘氨酸水溶液、NaOH溶液、THF、(Boc)₂O的THF溶液的体积比为20：(5～8)：(5～8)：(3～5)；所述NaOH溶液的物质的量浓度为1～3mol/L；7)BocGly‑Gln的制备：将含BocGly和缩合剂的THF溶液置于冰盐浴中，加入脱水剂，恒温反应5～7h，将生成的沉淀过滤得滤液，将滤液滴加到含谷氨酰胺和NaHCO₃的水溶液中，室温搅拌反应过夜，调节pH值到6，减压蒸馏除去THF，用乙酸乙酯萃取除去小极性杂质，再调节pH值到3～4，将反应液置于冰箱中0～4℃过夜，结晶析出白色沉淀，沉淀经过滤、干燥，得到结构式如(7)所示的BocGly‑Gln，所述含BocGly和缩合剂的THF溶液、含Gln和NaHCO₃的水溶液的体积比为3：(2～4)；所述BocGly、缩合剂、脱水剂、谷氨酰胺、NaHCO₃的摩尔比为1：(1～1.3)：(1～1.3)：(1～1.2)：(1.3～1.6)；所述缩合剂为N‑羟基琥珀酰亚胺、1‑羟基苯并三唑中的一种；所述脱水剂为碳化二亚胺类；8)BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂ArgOMe的制备：将含BocGly‑Gln和缩合剂的THF溶液置于冰盐浴中，加入脱水剂，恒温反应5～7h，将生成的沉淀过滤得滤液，将滤液滴加到含Pro‑NO₂ArgOMe和三乙胺的DMF溶液中，滴加完后室温搅拌反应过夜，减压蒸馏除去THF，用碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯萃取3～5次，萃取液经碳酸氢钠洗涤、5％的乙酸溶液洗涤、饱和氯化钠溶液洗涤、硫酸钠干燥、减压蒸馏、二氯甲烷重结晶，得到结构式如(8)所示的BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂ArgOMe，所述BocGly‑Gln、缩合剂、脱水剂、Pro‑NO₂ArgOMe、三乙胺的摩尔比为1：(1.1～1.3)：(1～1.3)：(1.0～1.2)：(1.0～1.5)；所述THF溶液、DMF溶液的体积比为1：(0.2～0.4)；所述缩合剂为N‑羟基琥珀酰亚胺、1‑羟基苯并三唑中的一种；所述脱水剂为碳化二亚胺类；9)BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg的制备：将BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂ArgOMe的乙醇溶液置于冰盐浴中，滴加NaOH溶液，滴加完后恒温反应1～2h，减压蒸馏，用乙醇溶解打浆，过滤除去固体杂质，减压蒸馏，得到结构式如(9)所示的BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg，所述BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂ArgOMe的乙醇溶液中BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂ArgOMe、乙醇的质量体积比为1g：(5～10)mL；所述乙醇溶液、NaOH溶液的体积比为20：(3～6)；所述NaOH溶液的物质的量浓度为1～2mol/L；10)Gly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg的制备：将BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg溶于盐酸乙酸乙酯溶液，室温下搅拌反应，析出固体，过滤，得到结构式如(10)所示的Gly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg，所述BocGly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg、盐酸乙酸乙酯溶液的质量体积比为1g：(10～25)mL；所述盐酸乙酸乙酯溶液的物质的量浓度为2～4mol/L；11)终产物四肽Gly‑Gln‑Pro‑Arg的制备：将Gly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg溶于乙醇和水的混合溶液，加入钯碳，充入氢气，25～40℃搅拌过夜，过滤除去滤渣，减压蒸馏，再加入乙醇，析出白色沉淀，过滤，干燥，得到结构式如(11)所示的四肽Gly‑Gln‑Pro‑Arg，所述Gly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg、乙醇和水的混合溶液的质量体积比为1g：(10～25)mL；所述乙醇和水的混合溶液中乙醇、水的体积比为1：(1～2)；所述Gly‑Gln‑Pro‑NO₂Arg、钯碳的质量比为1：(0.06～0.125)。