[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法有效
| 申请号： | 201610031417.3 | 申请日： | 2016-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN106978442B | 公开（公告）日： | 2020-06-19 |
| 发明（设计）人： | 岳庆;许波;李凡池;季平 | 申请（专利权）人： | 爱康得生物医学技术（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 陶海锋;孙周强 |
| 地址： | 215126 江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法，首先将嵌合抗原受体慢病毒表达载体、pGP质粒、pVSVG质粒与聚醚酰亚胺混合，吹打均匀得到DNA/PEI复合物；将293细胞接种于培养皿，然后加入完全培养基培养；然后将DNA/PEI复合物滴加入培养皿中；培养4～10小时后，去除培养基；然后加入条件培养基，继续培养8～32小时后，收集培养基；然后离心处理，得到含有慢病毒的培养基上清；将蔗糖溶液加入离心管中，然后沿着离心管壁加入含有慢病毒的培养基上清；然后离心处理，去除离心上清后，加入缓冲液；然后以此转染T细胞，培养得到嵌合抗原受体T细胞。本发明以慢病毒包装系统为基础，达到60%以上的转染效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 嵌合 抗原 受体 细胞 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在缓冲液中，将嵌合抗原受体慢病毒表达载体、pGP质粒、pVSVG质粒与聚醚酰亚胺混合，吹打均匀，室温静置得到DNA/PEI复合物；（2）将293细胞接种于培养皿，然后加入完全培养基，置于培养箱中，培养40～60小时；然后将步骤（1）的DNA/PEI复合物滴加入培养皿中；然后再将培养皿置于培养箱中；培养4～10小时后，去除培养基；然后加入条件培养基，继续置于培养箱中；培养8～32小时后，收集培养基；然后离心处理，得到含有慢病毒的培养基上清；（3）将蔗糖溶液加入离心管中，然后沿着离心管壁加入步骤（2）的含有慢病毒的培养基上清；然后离心处理，去除离心上清后，加入缓冲液；得到含有慢病毒的重悬溶液；（4）将T细胞加入培养容器中，然后加入细胞因子与抗体复合物，培养40～60小时；然后加入步骤（3）的含有慢病毒的重悬溶液；然后加入终浓度为4～8μg/mL的聚凝胺，混匀后，密封培养容器；然后进行首次离心处理；离心结束后，去除密封；然后将培养容器置于培养箱中；培养18～32小时后，进行再次离心处理；然后去除离心上清；然后加入培养基得到混合物；然后将混合物加入新的培养容器中，培养得到嵌合抗原受体T细胞。
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