[发明专利]一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法

摘要

本发明涉及一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法，包括柠檬酸钠还原法制备金纳米颗粒，种子生长法AuNSs；将过量的MTG滴加入到G3.NH2的溶液中，恒温反应得G3.NH2‑SH，然后滴加入到AuNSs水溶液中，搅拌得G3‑AuNSs；将6‑M与COOH‑PEG‑NH2反应得COOH‑PEG‑MAL；然后SH‑RGD与COOH‑PEG‑MAL反应得COOH‑PEG‑RGD，活化后加入到G3‑AuNSs的DMSO分散液中，反应得Au DSNSs，与VEGF siRNA共同孵育，即得。本发明反应条件温和，工艺简单，易于操作，在诊疗一体化领域具有潜在的应用价值。

主权项

一种RGD修饰树状大分子稳定的功能化金纳米星/siRNA复合物的制备方法，包括：(1)将柠檬酸三钠溶于超纯水中，快速加入到煮沸的氯金酸溶液里，持续反应，冷却，得到柠檬酸钠稳定的金纳米颗粒；其中，柠檬酸三钠与氯金酸溶液的体积比为1.5:10；(2)将步骤(1)中的柠檬酸钠稳定的金纳米颗粒加入到氯金酸溶液中，避光搅拌，加入AgNO3和抗坏血酸AscorbicAcid，搅拌反应2～4h，纯化，冷冻干燥，得到金纳米星AuNSs；其中，HAuCl4、AscorbicAcid、AgNO3的摩尔比为500：1：40～60；(3)将过量的巯基乙酸甲酯MTG逐滴加入到第三代聚酰胺‑胺树状大分子G3.NH2的超纯水溶液中，60℃～80℃恒温反应12～48h，透析，冷冻干燥，得到部分巯基封端的聚酰胺‑胺三代树状大分子G3.NH2‑SH；(4)将步骤(3)中的G3.NH2‑SH溶于超纯水中，逐滴加入到步骤(2)中的AuNSs的水溶液中，搅拌12～24h，离心，洗涤，冷冻干燥，得到树状大分子稳定的金纳米星G3‑AuNSs；其中，G3.NH2‑SH与AuNSs的质量比为5～10:1；(5)将6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯6‑M与COOH‑PEG‑NH2混合于DMSO溶液中，搅拌反应8‑10小时，得到COOH‑PEG‑MAL；然后再将充分溶解于DMSO中的巯基封端的RGD即SH‑RGD逐滴加入到COOH‑PEG‑MAL的DMSO溶液中，搅拌反应1～2天，透析，冷冻干燥，即得到COOH‑PEG‑RGD；其中，SH‑RGD：6‑M：COOH‑PEG‑NH2的摩尔比为1:1～1.2:1～1.2；(6)将步骤(5)中的COOH‑PEG‑RGD经过EDC和NHS活化，然后加入到步骤(4)中G3‑AuNSs的DMSO分散液中，搅拌反应2～4天，离心，洗涤，冷冻干燥，得到Au‑G3‑PEG‑RGD NSs，简称Au DSNSs；其中，COOH‑PEG‑RGD与Au DSNSs中树状大分子的摩尔比为4～6:1；(7)将步骤(6)中的Au DSNSs与VEGF siRNA共同孵育15‑20分钟，得到复合物Au DSNSs/siRNA。