[发明专利]基于pET22b基因工程菌株的抗菌蛋白表达、提取和纯化方法

摘要

本发明公开了一种基于pET22b基因工程菌株的抗菌蛋白表达、提取和纯化方法，以基因工程菌株ZSM‑12(pET‑22b‑TasA‑BL21)为对象，建立一种抗菌蛋白高表达方法；并且建立一种蔗糖和溶菌酶同时处理从细胞周质空间提取抗菌蛋白方法以及一种改进的HIS柱纯化抗菌蛋白方法。应用本发明，抗菌蛋白表达率达34.2％，菌体破壁后的抗菌蛋白含量高、杂蛋白少，HIS柱纯化后蛋白纯度为电泳一条带，蛋白含量为67.8mg/l，蛋白收率为90.8％。纯化后的抗菌蛋白具有抑制番茄灰霉病、叶霉病、玉米茎基腐病、小麦赤霉病菌和水稻稻曲病菌生长功能。

主权项

1.一种基于pET22b基因工程菌株的抗菌蛋白表达方法，其特征在于所述抗菌蛋白表达方法步骤如下：取‑70℃冷冻保藏的基因工程菌株pET‑22b‑TasA‑BL21划线接种于含氨苄青霉素的LB固体平板上，37℃温箱培养18h，挑较大菌落转接于5ml含氨苄青霉素的LB液体培养液中，37℃，170r/min震荡培养18h，然后按2％接种量接种到100ml含氨苄青霉素的LB液体培养基中，30℃170r/min震荡培养至OD600＝1.2‑1.8，加入IPTG至0.05‑0.1mM，15‑20℃震荡培养4h。