[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统定点敲除水稻OsPDCD5基因第二外显子的方法有效
| 申请号： | 201610004499.2 | 申请日： | 2016-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN106939316B | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | 罗小金;董贤欣;杨金水;孙凡;姜玲 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统定点敲除水稻OsPDCD5基因第二外显子的方法：在水稻OsPDCD5基因第二外显子区域选取靶标片段并构建植物CRISPR/Cas9重组载体，通过农杆菌侵染方法导入到水稻愈伤并再生成苗，在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下，OsPDCD5基因第二外显子的双链被剪切，再通过细胞自身DNA修复功能，最终实现靶标基因片段上的随机插入或随机缺失，通过PCR扩增测序的方法，本发明共获取9株目的片段出现点突变的株系，经过表型鉴定，实现了增加水稻株高和产量的目的。本发明为培育高产优质水稻品种提供了一种高效的育种方式。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 crispr cas9 系统 定点 水稻 ospdcd5 基因 第二 外显子 方法 | ||
【主权项】：
一种利用CRISPR/Cas9系统定点敲除水稻OsPDCD5基因第二外显子的方法，其特征在于：选取OsPDCD5基因第二外显子中的如SEQ ID NO.2所示的23bp序列作为靶序列，扩增目的片段，采用酶切连接的方式将目的片段连接到pBWA(V)H‑cas9载体上，得融合载体；使用农杆菌介导的方式将该融合载体转化到水稻中，在转基因T1后代中PCR鉴定阳性植株，并在T2及T3代中寻找突变位点纯合的株系。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于复旦大学，未经复旦大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610004499.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种可调整尺码的儿童背心
- 下一篇：一种儿童夹克
