[发明专利]CMP依赖性的唾液酸酶活性

摘要

本发明涉及具有N‑端截短缺失或内部缺失的某些糖基转移酶变体的性能。在有作为共底物的CMP‑活化的唾液酸存在下和在有合适的受体位点存在下，在这里公开的任何突变体表现出α‑2,6‑唾液酸转移酶酶活性。在本发明中记录的一个基本发现是，这样的酶不仅能够催化唾液酸基（sialidyl）部分的转移，而且它们还能够催化来自聚糖的在末端结合的唾液酸的水解裂解。具体地，发现在有胞苷‑5’‑单磷酸(CMP)存在下，糖基转移酶活性被抑制，且唾液酸酶活性被刺激。发现唾液酸酶活性依赖于氨基酸的特定段(位置90‑108)在参考(野生型)hST6Gal‑I多肽的多肽序列中的存在。发现该序列部分在N‑端截短变体中的缺失会消除唾液酸酶活性，特别是在有和没有CMP存在下。因而，公开了采用本文中记录的CMP介导的反馈调节的组合物、用途和方法。

主权项

一种水性组合物，其包含(a)可溶性的人β‑半乳糖苷‑α‑2,6‑唾液酸转移酶I，其包含SEQ ID NO:1中从位置90至位置108的氨基酸基序；(b)胞苷‑5’‑单磷酸‑N‑乙酰基神经氨酸或其功能等同物；(c)选自糖蛋白和糖脂的糖基化的靶分子，所述靶分子包含一个或多个天线，至少一个天线具有含有在半乳糖基残基的C6位置处的羟基的β‑D‑半乳糖基‑1,4‑N‑乙酰基‑β‑D‑葡糖胺部分作为末端结构；(d)水溶液，其允许糖基转移酶酶活性；其中所述水性组合物还包含在允许糖基转移酶酶活性的条件下能够水解5’‑胞苷‑单磷酸中的磷酸酯键的酶。