[发明专利]CRISPR支持的多路基因组工程化有效
申请号: | 201580018819.3 | 申请日: | 2015-02-11 |
公开(公告)号: | CN106164271B | 公开(公告)日: | 2020-06-02 |
发明(设计)人: | R·T·吉尔;安德鲁·加斯特 | 申请(专利权)人: | 科罗拉多州立大学董事会(法人团体) |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/86;C12N15/90;C12N15/10;C40B40/08;C40B50/06 |
代理公司: | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人: | 郑霞 |
地址: | 美国科*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | 本文描述了用于理性、多路操作开放阅读框(例如,蛋白质文库中)中的染色体或者细胞或细胞群体中染色体的任何区段的方法和载体,其中使用不同的CRISPR系统。 | ||
搜索关键词: | crispr 支持 路基 工程 | ||
【主权项】:
一种基因组工程化方法,其包括:(a)向细胞中引入载体,该载体编码:(i)编辑盒,其包含与所述细胞中核酸的靶区域同源并且包含相对于该靶区域的至少一个核苷酸的突变(被称为所需突变)的区域,和前间隔区邻近基序(PAM)突变;(ii)启动子;以及(iii)至少一个指导RNA(gRNA),其包含:(a)与所述靶区域的一部分互补的区域(RNA);以及(b)募集Cas9核酸酶的区域(RNA),从而产生包含所述载体的细胞;(b)使包含所述载体的细胞维持在表达Cas9的条件下,其中Cas9核酸酶在所述载体上编码、在第二载体上编码或在所述细胞的基因组上编码,导致产生包含所述载体并且不包含所述PAM突变的细胞和包含所述载体和所述PAM突变的细胞;(c)在适合于细胞活力的条件下培养(b)的产物,从而产生活细胞;(d)获得在(c)中产生的活细胞;以及(e)对在(d)中获得的至少一个活细胞的载体的编辑寡核苷酸进行测序,并鉴定至少一个密码子的突变。
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