[发明专利]一种花粉管装载荧光染料的方法

摘要

本发明公开了一种花粉管装载荧光染料的方法，包括以下步骤：第一步，将花粉包裹于称量纸中，放置于密闭的硅胶瓶中保存于低温冰箱中；第二步，花粉从冰箱中取出后，在常温下放置2h后加入培养液中，将其搅拌均匀后置于25℃恒温箱中培养2h，第三步，将培养液与裂解液、染色剂对应混合，避光10‑30min，然后置于25℃恒温箱中避光培养2h。本发明采用裂解液处理，破坏花粉的细胞膜，使得染色剂能够快速有效地进入细胞。本发明通过使用裂解液及染色剂(Fluo‑4AM‑ester)，在常温(25℃)下对花粉管处理20min，能够对花粉管中钙离子成功染色。

主权项

1.一种花粉管装载荧光染料的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，将花粉包裹于称量纸中，放置于密闭的硅胶瓶中保存于低温冰箱中；第二步，花粉从冰箱中取出后，在常温下放置2h后加入培养液中，将其搅拌均匀后置于25℃恒温箱中培养2 h，第三步，将培养液与裂解液、染色剂对应混合，避光10‑30min，然后置于25℃恒温箱中避光培养2 h；在所述第二步中，所述培养液是将溶质溶解在30 mM 的2‑(N‑吗啉)乙磺酸一水合物溶液中，所述溶质包括蔗糖、聚乙二醇、硼酸、硝酸钙；其中，在所述培养液中溶质的质量百分比如下所示：10% 蔗糖，20% 聚乙二醇，0.01% 硼酸，0.03% 硝酸钙；所述裂解液中的CTAB质量百分比为2%，Tris‑HCl 的浓度为100 mM, EDTA的浓度为 40 mM；所述染色剂为Fluo‑4 AM‑ester。