[发明专利]一种快速、定量评价化合物对斑马鱼血管生成促进作用的方法

摘要

本发明涉及一种快速、定量评价化合物对斑马鱼血管生成促进作用的方法，该方法采用血管特异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼，通过直接在斑马鱼培养用水中加入待测药物，检测斑马鱼尾静脉网的相对面积，建立了一种快速、定量评价化合物对斑马鱼血管生成促进的方法，以用于药物筛选。在斑马鱼实验中，本发明首次将尾静脉网相对面积作为血管生成作用的评价新指标，分析待测物是否具有促进血管生成作用，更加科学、客观，提高了结果的准确性。

主权项

1.一种快速、定量评价化合物对斑马鱼血管生成促进作用的方法，包括步骤如下：(1)将受精后21h～24h的发育正常斑马鱼胚胎移入培养孔中，对培养孔中的斑马鱼胚胎连续给药孵育，记为待测化合物组；同时在相同条件下以不给药孵育设置对照，记为对照组；(2)麻醉孵育后对照组、待测化合物组的每条斑马鱼，采集每条斑马鱼的荧光显微图像，记录斑马鱼尾部血管荧光情况，测量每组斑马鱼的尾静脉(tPCV)网面积以及尾静脉网对应的节间血管(ISV)区域面积，按照如下公式计算tPCV网相对面积：tPCV网相对面积＝tPCV网面积/对应的节间血管(ISV)区域面积；(3)定量分析计算得到的每组斑马鱼tPCV网相对面积以表示，分析比较对照组、待测化合物组之间差异的显著性；当待测化合物组斑马鱼的大于对照组斑马鱼的且达到统计学上的显著性水平P<0.05，待测化合物组斑马鱼的节间血管(ISV)无缺失，说明待测药物对斑马鱼的血管生成具有促进作用。