[发明专利]一种提高诱导多能干细胞的体外分化造血效率的方法在审
| 申请号： | 201510881729.9 | 申请日： | 2015-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN105296428A | 公开（公告）日： | 2016-02-03 |
| 发明（设计）人： | 孙筱放;范荻;宋兵;牛晓华;范勇;何文茵 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学附属第三医院 |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭炜绵 |
| 地址： | 510150*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高诱导多能干细胞体外分化为造血干细胞效率的方法，该方法是将OP9与iPSCs体外共培养，同时分化培养基中添加了SCF、BMP4、IL-3、IL-6和TPO等营养因子。本发明方法使CD34+CD43+双阳性率上升至15.3％，分化效率明显上调，说明添加了正向调节因子可诱导iPSCs向造血干细胞分化，仅通过添加细胞因子方法即可方便快捷的提高分化效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 诱导 多能 干细胞 体外 分化 造血 效率 方法 | ||
【主权项】：
一种提高诱导多能干细胞体外分化为造血干细胞效率的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将OP9细胞培养至过密状态；(2)将iPS细胞用PBS洗涤2遍后加入分散酶消化，待克隆的边界出现轻微卷缩后吸走分散酶，再加入DMEN/F12培养基，用枪头将克隆吹散至成均匀块状，然后移至离心管中待其自然沉降，弃上清，加入分化培养基；(3)将已培养至过密状态的OP9细胞的培养基也更换为分化培养基；然后将步骤(2)得到的iPS细胞接种到OP9细胞中，在37℃、5％CO2的培养箱中培养一天后，第二天全部换液将死细胞及未贴壁细胞去除，之后隔天对半换液以提高分化效率，在第14天收取造血干细胞；所述的分化培养基是α‑MEM培养基加入10％胎牛血清、100umol/L硫代甘油，以及加入40ng/ml的干细胞因子、20ng/ml的骨形态发生蛋白4、20ng/ml的白细胞介素‑3、20ng/ml的白细胞介素‑6和20ng/ml的血小板生成素。
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