[发明专利]一种提高家蚕幼虫体重量的方法

摘要

本发明公开了一种提高家蚕幼虫体重量的方法。从五龄家蚕丝腺中提取总RNA，逆转录获得第1链cDNA，并以其为模板Rt-PCR扩增，克隆获得BmCrzR cDNA，并以其为模板PCR扩增，酶切后将DNA片段连接载体获得pFLAG-BmCrzR，再以其为模板PCR扩增获得反应模板，将反应模板与T7反应缓冲液、ATP液、CTP液、GTP液、UTP溶液和T7酶混合反应并进一步处理得到BmCrzR dsRNA；最终将BmCrzR dsRNA注射入四龄家蚕幼虫腹部，桑叶饲养，五龄家蚕体重增加。本发明方法提高家蚕幼虫体重量，是没有增加蚕食桑量，通过调控家蚕代谢来实现的，这对于研究家蚕的物质与能量代谢机制、进一步提高家蚕经济性状和生理机能以及传统养蚕产业的技术革新等，具有积极作用。

主权项

一种提高家蚕幼虫体重量的方法，其特征在于：1)解剖并收集五龄第3‑4天家蚕丝腺，从中提取总RNA，然后逆转录获得第1链cDNA；2)以第1链cDNA为模板，通过逆转录聚合酶链式反应(RT‑PCR)扩增，克隆获得家蚕Corazonin受体(BmCrzR)cDNA；3)再以BmCrzR cDNA为模板，通过PCR扩增得到BmCrzR DNA片段，琼脂糖凝胶电泳回收目的DNA片段，经HindIII/BamHI酶切后，与哺乳动物表达载体pFlag‑CMV‑3'连接，获得pFLAG‑BmCrzR；4)以pFLAG‑BmCrzR为模板，通过PCR扩增得到pFLAG‑BmCrzR DNA片段，琼脂糖凝胶电泳回收得到纯化的大小为893bp的目的DNA片段，作为反应模板；5)将反应模板与10×T7反应缓冲液、ATP液、CTP液、GTP液、UTP溶液、T7酶混合进行反应，然后进行多次处理得到BmCrzR dsRNA；6)给四龄第2‑3天的家蚕腹部注射10‑20μg BmCrzR dsRNA，用桑叶继续饲养，获得重量增加的五龄盛食期家蚕幼虫体。