[发明专利]一种心肌组织工程脱细胞化胶原膜片的制备方法

摘要

本发明提供了一种心肌组织工程脱细胞化胶原膜片的制备方法，选取天然猪蹄筋组织，采用反复冻融和核酸酶处理方法使组织去细胞化，可制备出不同厚度的去细胞化猪蹄筋膜片，厚度在5～30μm之间；所得膜片的主要成分为胶原蛋白，结构呈纤维状平行排列，与心肌组织细胞外基质成分和结构相似，可诱导心肌细胞延纤维方向伸展，因此可用于培养心肌细胞，旨在构建类心脏组织。本发明的优点在于取材方便，价格低廉，可高度可控的制备胶原膜片，制备过程稳定，产物形貌均一，方法简单、温和，能够使胶原膜片保持完整的结构、形态、生物特性以及材料固有的力学特性，并具有良好的生物相容性和生物可降解性，非常适合用于心肌组织工程构建和再生医学。

主权项

一种心肌组织工程脱细胞化胶原膜片的制备方法，其特征在于，该方法按照以下步骤进行：(1)清洗猪蹄去除盐渍、污物和油污，解剖猪蹄，将猪蹄筋取出，剔除表面筋膜，生理盐水清洗，获得长0.5～2cm，直径0.5～1.5cm的猪蹄筋；(2)采用反复冻融和核酸酶处理方法联合去除猪蹄筋组织内在细胞：将上述猪蹄筋置于耐低温的容器内，通入液氮，1～5min后快速转移至盛有生理盐水的容器内，37℃恒温水浴复温5～10min，反复冻融3～5次；采用DNase和RNase对猪蹄筋进行脱细胞化处理；将猪蹄筋用OTC冰冻包埋剂包埋预冻后制备出不同厚度的去细胞化胶原膜片，厚度在5～30μm之间。