[发明专利]一种信号放大的高灵敏水环境中Hg2+检测方法

摘要

本发明公开了一种信号放大的高灵敏水环境中Hg²⁺检测方法。所述检测方法主要包括以下步骤：先对磁性纳米颗粒进行合成与核酸探针修饰，并结合滚环扩增技术与磁性分离富集技术以构建检测方法体系，随后对PBS缓冲液中不同浓度Hg²⁺样品进行荧光强度的扫描，得到Hg²⁺浓度与荧光强度之间的线性区间；再将检测方法体系应用于实际环境水样样本中Hg²⁺含量的检测，采用标准加入法，计算回收率，从而评估检测方法的实际应用性。本发明方法不仅可以达到传统方法的检测效果，而且具有良好的选择性；响应速度快、操作简便和价格低廉；荧光信号强且稳定，保证了实验方法的重复性以及荧光信号在复杂环境中的可辨识度，使得检测方法的实际应用性得到了强有力的保证。

主权项

1.一种信号放大的高灵敏水环境中Hg2+检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）合成氨基修饰磁性Fe3O4纳米颗粒NH2‑Fe3O4，配制NH2‑Fe3O4溶液；（2）捕获探针H1修饰NH2‑Fe3O4，配制H1‑Fe3O4纳米颗粒溶液；（3）配制不同浓度Hg2+的溶液；所述不同浓度Hg2+的溶液浓度分别为：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、15.0 nmol/L；（4）缓冲液中Hg2+含量检测，步骤为：准备一系列离心管，分别加入0.02体积份不同浓度Hg2+溶液，0.01体积份1.0 μmol/L信号探针H2、H3，以及2.0体积份H1‑Fe3O4纳米颗粒溶液；然后将混合溶液室温反应20.0 min，随后磁性分离去除上清液，PBS缓冲液洗涤；洗涤完毕后，磁性纳米颗粒体系悬浮液加热到95℃后在冰水混合物中冷却；最后磁性分离，测定上清液荧光强度变化以对Hg2+进行定量分析；（5）准备待测环境水体样本；所述待测环境水体样本为：河水、饮用水或自来水样本；（6）标准加入法检测待测环境水体样本中Hg2+含量，步骤为：准备一系列离心管，分别加入0.02体积份标准浓度Hg2+溶液，0.01体积份1.0 μmol/L信号探针H2、H3，以及2.0体积份H1‑Fe3O4纳米颗粒溶液；所述加入的标准浓度Hg2+浓度分别为2.0、4.0、6.0 nmol/L；然后将混合溶液室温反应20.0 min，随后磁性分离去除上清液，PBS缓冲液洗涤；洗涤完毕后，磁性纳米颗粒体系悬浮液加热到95℃后在冰水混合物中冷却；最后磁性分离，测定上清液荧光强度变化以对Hg2+进行定量分析；所用荧光强度的测定仪器为Perkin‑Elmer LS‑55荧光磷光分光光度计，设定参数分别为最大激发波长493 nm，最大发射波长520 nm，激发和发射狭缝10 nm；捕获探针H1序列为：5’ NH2‑(C)6‑GCT AAG TTT GTG GTT TGT CGT TAGC‑3’；信号探针H2序列为：5’ AGA CGC CTG GCA GCC CGT CTT TCC TCT TTC‑FAM 3’，信号探针H3序列为：5’ FAM‑GGC TGC CAG GCG TCT GAA AGA GGA AAG ACG 3’。