[发明专利]一种信号放大的高灵敏水环境中Hg2+检测方法

权利要求书

1.一种信号放大的高灵敏水环境中Hg²⁺检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）合成氨基修饰磁性Fe₃O₄纳米颗粒NH₂-Fe₃O₄，配制NH₂-Fe₃O₄溶液；

（2）捕获探针H1修饰NH₂-Fe₃O₄，配制H1-Fe₃O₄纳米颗粒溶液；

（3）配制不同浓度Hg²⁺的溶液；所述不同浓度Hg²⁺的溶液浓度分别为：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、15.0 nmol/L；

（4）缓冲液中Hg²⁺含量检测，步骤为：准备一系列离心管，分别加入0.02体积份不同浓度Hg²⁺溶液，0.01体积份1.0 μmol/L信号探针H2、H3，以及2.0体积份H1-Fe₃O₄纳米颗粒溶液；然后将混合溶液室温反应20.0 min，随后磁性分离去除上清液，PBS缓冲液洗涤；洗涤完毕后，磁性纳米颗粒体系悬浮液加热到95℃后在冰水混合物中冷却；最后磁性分离，测定上清液荧光强度变化以对Hg²⁺进行定量分析；

（5）准备待测环境水体样本；所述待测环境水体样本为：河水、饮用水或自来水样本；

（6）标准加入法检测待测环境水体样本中Hg²⁺含量，步骤为：准备一系列离心管，分别加入0.02体积份标准浓度Hg²⁺溶液，0.01体积份1.0 μmol/L信号探针H2、H3，以及2.0体积份H1-Fe₃O₄纳米颗粒溶液；所述加入的标准浓度Hg²⁺浓度分别为2.0、4.0、6.0 nmol/L；然后将混合溶液室温反应20.0 min，随后磁性分离去除上清液，PBS缓冲液洗涤；洗涤完毕后，磁性纳米颗粒体系悬浮液加热到95℃后在冰水混合物中冷却；最后磁性分离，测定上清液荧光强度变化以对Hg²⁺进行定量分析；所用荧光强度的测定仪器为Perkin-Elmer LS-55荧光磷光分光光度计，设定参数分别为最大激发波长493 nm，最大发射波长520 nm，激发和发射狭缝10 nm；

捕获探针H1序列为：5’ NH₂-(C)₆-GCT AAG TTT GTG GTT TGT CGT TAGC-3’；信号探针H2序列为：5’ AGA CGC CTG GCA GCC CGT CTT TCC TCT TTC-FAM 3’，信号探针H3序列为：5’ FAM-GGC TGC CAG GCG TCT GAA AGA GGA AAG ACG 3’。

2.根据权利要求1所述的信号放大的高灵敏水环境中Hg²⁺检测方法，其特征在于，所述步骤（1）的具体步骤如下：将2.0质量份FeCl₃•6H₂O、14.0质量份1,6-己二胺及4.0质量份无水醋酸钠溶解于60体积份乙二醇中形成混合溶液；然后将混合溶液在55℃条件下搅拌完全溶解形成透明溶液；随后将透明溶液转移到高压反应釜中，200℃反应6.0 h；反应结束后将得到的NH₂-Fe₃O₄用超纯水和无水乙醇清洗，然后分散于超纯水中，4.0 ℃保存待用。