[发明专利]一种FTH1基因可控表达的稳定细胞株的构建方法

摘要

本发明提供了一种FTH1基因可控表达的稳定细胞株的构建方法，包括以下步骤：（1）获取FTH1基因；（2）将FTH1基因转入Tet-On载体获得重组质粒；（3）将重组质粒构建为慢病毒载体；（4）接种人神经母细胞瘤细胞，待细胞融合达40-50%，加入慢病毒液0.8μl/ml（滴度为1×10⁹TU/ml）和聚凝胺5μg/ml,聚乙二醇0.5-1μg/ml的完全培养基，放入培养箱中培养20-24h；（5）细胞传代后，细胞融合50-60%，加入8 μg/ml嘌呤霉素的培养基处理7d，再加入4μg/ml嘌呤霉素的培养基筛选3d，获得可诱导表达FTH1基因的稳定细胞株，命名为SK-N-SH/Tet-on/FTH1。本发明对FTH1的表达水平和表达时间进行了精确调控，使其在需要MR成像时表达，不需要MR成像时关闭。

主权项

一种FTH1基因可控表达的稳定细胞株的构建方法，包括以下步骤：(1)获取FTH1基因；(2)将FTH1基因转入Tet‑On载体获得重组质粒；(3)将重组质粒构建为慢病毒载体；(4)接种人神经母细胞瘤细胞，待细胞融合达40‑50％，加入慢病毒液0.8μl/ml(滴度为1×10⁹TU/ml)和聚凝胺5μg/ml,聚乙二醇0.5‑1μg/ml的完全培养基，放入培养箱中培养20‑24h；(5)细胞传代后，细胞融合50‑60％，加入8μg/ml嘌呤霉素的培养基处理7d，再加入4μg/ml嘌呤霉素的培养基筛选3d，获得可诱导表达FTH1基因的稳定细胞株，命名为SK‑N‑SH/Tet‑on/FTH1。