[发明专利]一种草莓果实愈伤组织的培养方法

摘要

本发明公开了一种草莓果实愈伤组织的培养方法，首先将草莓果实无菌化处理，在没有光照的黑暗培养箱中25℃培养5天后，果实原片周围会有不规则形状的愈伤组织长出，这时在无菌条件下切下果肉边缘的愈伤接种于愈伤组织增殖培养基中，培养10~15天以后，愈伤体积变为原来体积的3~4倍大小。本发明提供了一种草莓果实愈伤组织的培养方法，果实愈伤组织诱导率可达到100%，草莓的分子生物学以及基因工程研究提供了一条新的途径，为草莓基因工程研究和基因转化提供一种新的试验材料，同时也为草莓果实愈伤的培养提供了参考和借鉴。

主权项

一种草莓果实愈伤组织的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）草莓果实的无菌化处理果实表面用流水冲洗干净，在无菌条件下，用75%的乙醇消毒2分钟后用无菌去离子水冲洗3次，然后用10%的次氯酸钠消毒8分钟，再用无菌去离子水冲洗4~5次，然后用无菌滤纸吸干果皮表面水分；消毒完成后用无菌的手术刀片小心削去果皮，从果实中间切开，选取果心部分，用打孔器切直径0.5厘米的圆片接种于愈伤诱导培养基上；（2）草莓果实的圆片培养在没有光照的黑暗培养箱中25℃培养5天后，果实原片周围会有不规则形状的愈伤组织长出，这时在无菌条件下切下果肉边缘的愈伤接种于培养基中进行愈伤组织增殖，培养10~15天以后，愈伤体积变为原来体积的3~4倍大小；所述培养基为MS培养基，每升MS培养基中包括6‑BA0.4mg/L、NAA0.2 mg/L、蔗糖20g/L、琼脂粉6g/L；每升MS培养基包括：KNO3硝酸钾1500 mg/L、(NH4)2SO4硫酸铵500 mg/L、CO(NH2)2 尿素200 mg/L、MgSO4·7H2O七水合硫酸镁400 mg/L、KH2PO4磷酸二氢钾200mg/L、KI碘化钾1.1 mg/L、MnSO4·4H2O四水合硫酸锰20 mg/L、ZnSO4·7H2O七水合硫酸锌8 mg/L、H3BO3硼酸5 mg/L、Fe‑EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁10 mg/L、CaCl2·2H2O二水合氯化钙100 mg/L、肌醇100 mg/L、烟酸2 mg/L、维生素B11mg/L、维生素B61 mg/L、维生素C2 mg/L。