[发明专利]一种可替代鱼粉的菌糠蛋白肽及其制备方法和在水产养殖中的应用

摘要

一种可替代鱼粉的菌糠蛋白肽及其制备方法和在水产养殖中的应用，属于微生物和水产养殖饲料技术领域。本发明以食用菌菌糠废料为基础原料，首先采用先灵芝菌，后酿酒酵母的分步固体发酵技术，将食用菌菌糠的原始营养物质充分转化为高品质的菌体蛋白和多糖类；然后采用纤维素酶、食用菌水解酶和酵母抽提酶相结合的酶解技术，使蛋白质充分释放并水解为短分子量的小肽；最后经浓缩、干燥，获得富含易消化小肽，并具有较强DPPH自由基清除能力的菌糠蛋白肽产品。本发明具有菌糠利用率高、产品得率高、操作简单，实用性强，便于推广的优点；用于水产养殖饲料，可部分替代鱼粉，起到促进水生动物生长、提高饲料利用率的作用。

主权项

1.一种可替代鱼粉的菌糠蛋白肽的制备方法，其特征在于以食用菌菌糠废料为基础原料，首先采用先灵芝菌、后酿酒酵母的分步固体发酵技术，将食用菌菌糠的原始营养物质充分转化为高品质的菌体蛋白和多糖类；然后采用纤维素酶、食用菌水解酶AO2和酵母抽提酶相结合的酶解技术，使蛋白质充分释放并水解为短分子量的小肽；最后经浓缩、干燥，获得富含易消化小肽，即可替代鱼粉的菌糠蛋白肽；其制备步骤如下：（1）菌糠的预处理将块状食用菌菌糠打碎，并除去肉眼可见的杂质后，转移至烘箱，50℃干燥至含水量低于5%，粉碎，过40目筛，备用；（2）菌糠的发酵所采用的菌糠发酵工艺是以食用菌菌糠废料为基础原料，先接种灵芝菌，发酵长满菌丝后再接种酿酒酵母的混菌固体分步发酵技术；①菌体活化灵芝菌种划线接种于PDA斜面培养基，PDA斜面培养基组成以g/L计为：葡萄糖20、琼脂20，用土豆汁配制，pH自然；28℃培养7天后，观察其生长情况，长势良好即为成熟，准备移种；土豆汁制备方法为：土豆200g，去皮，切成小块，加入1L去离子水煮沸30min，过滤，所得滤液用去离子水定容至1L；酿酒酵母划线接种于麦芽汁琼脂培养基，28℃培养2天后，观察其生长情况，长势良好即为成熟，准备移种；所使用的灵芝菌和酿酒酵母，均为农业和食品领域常用的生产菌种，通过商业途径或国家指定机构购买；所使用的麦芽汁琼脂培养基从市售途径购买；②种子培养液制备用接种铲从斜面上挑取大1cm×1cm的灵芝菌块，接入经灭菌的灵芝菌液体培养基中，140r/min旋转式摇床，28℃培养7天；灵芝菌液体培养基组成以g/L计为：豆饼粉20、玉米粉20、葡萄糖20、K2HPO4 1、MgSO4 0.5、VB 0.12，用自来水配制，pH自然；用接种环从斜面上挑取一环成熟的酿酒酵母菌体，接入经灭菌的麦芽汁液体培养基中，150r/min旋转式摇床，28℃培养2天；所使用的麦芽汁液体培养基从市售途径购买麦芽汁培养基粉末后，用自来水配制，pH自然；③分步发酵将灵芝菌种子培养液以体积比5%的接种量接入已灭菌的菌糠固体发酵培养基中，28℃静置培养7天；然后，以108个/g的接种量接入酿酒酵母种子培养液，28℃培养4天；菌糠固体发酵培养基组成以g/kg计为：菌糠880，麸皮100，尿素20，料水重量比1︰1.8，pH自然；（3）菌糠的酶水解将发酵结束后的固体培养物置于烘箱中50℃烘干，粉碎，水洗除杂；按料水重量比1︰5加水，调节pH至4.8，以烘干固体培养物的重量百分比，加入纤维素酶0.7%，50℃酶解1h；接着调节pH至6.5，以烘干固体培养物的重量百分比，加入食用菌水解酶AO2 0.5%、酵母抽提酶1%，55℃酶解4h；酶水解结束后，升温至85℃，灭酶10min；（4）菌糠蛋白肽的提取将灭酶后的水解液，4000r/min离心15 min，收集上清液减压浓缩至1/4体积，喷雾干燥得到菌糠蛋白肽粉。