[发明专利]一种适用于多种基因型小麦小孢子培养的方法

摘要

本发明公开了一种适用于多种基因型小麦小孢子培养的方法。本发明所提供的培养小麦小孢子获得再生植株的方法，包括：(1)将待培养小麦的小孢子接种于胚状体诱导培养基，进行诱导培养，得到小孢子胚状体；(2)将所述小孢子胚状体接种于再生培养基，进行再生培养，得到再生苗；(3)将所述再生苗接种于生根培养基，进行生根培养，得到所述待培养小麦的再生植株。该方法适用于多种基因型小麦品种，并且该方法的胚状体诱导率、植株再生率、绿苗率、自然加倍率显著高于传统的常规小孢子培养方法。本发明对于加速小麦单倍体育种和转基因小麦的商业化进程，具有重要的意义和应用价值。

主权项

1.一种培养小麦小孢子获得再生植株的方法，包括：(1)将待培养小麦的小孢子接种于胚状体诱导培养基，进行诱导培养，得到小孢子胚状体；所述胚状体诱导培养基的溶剂为水，溶质及浓度如下：KNO3 1415mg/L；(NH4)2SO4232mg/L；KH2PO4 200mg/L；CaCl2·2H2O 83mg/L；MgSO4·7H2O 93mg/L；KI 0.4mg/L；MnSO4 5mg/L；H3BO3 5mg/L；ZnSO4·7H2O 5mg/L；CoCl·6H2O 0.0125mg/L；CuSO4·5H2O 0.0125mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.0125mg/L；FeSO4·7H2O 27.8mg/L；Na2EDTA37.2mg/L；VB1 5mg/L；VB6 0.5mg/L；烟酸0.5mg/L；肌醇50mg/L；谷氨酰胺500mg/L；谷胱甘肽0.615mg/L；聚蔗糖100 000mg/L；麦芽糖90000mg/L；2,4‑D 0.2mg/L；糠氨基嘌呤0.2mg/L；头孢噻肟100mg/L；pH7.0；(2)将所述小孢子胚状体接种于再生培养基，进行再生培养，得到再生苗；所述再生培养基的溶剂为水，溶质及浓度如下：KNO3 1500mg/L；NH4NO3 250mg/L；KH2PO4 200mg/L；CaCl2·2H2O 450mg/L；MgSO4·7H2O 350mg/L；KI 0.75mg/L；MnSO4 15mg/L；H3BO3 5mg/L；ZnSO4·7H2O 7.5mg/L；CoCl·6H2O 0.025mg/L；CuSO4·5H2O 0.025mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L；FeSO4·7H2O 27.80mg/L；Na2EDTA37.20mg/L；VB1 10mg/L；VB6 1mg/L；烟酸1mg/L；肌醇200mg/L；泛酸钙1.0mg/L；抗坏血酸1.0mg/L；麦芽糖30000mg/L；2,4‑D 0.10mg/L；玉米素5.0mg/L；CuSO4 25mg/L；pH5.70；(3)将所述再生苗接种于生根培养基，进行生根培养，得到所述待培养小麦的再生植株；所述生根培养基的溶剂为水，溶质及浓度如下：KNO3 950mg/L；NH4NO3 825mg/L；KH2PO4 85mg/L；CaCl2·2H2O 220mg/L；MgSO4·7H2O 185mg/L；KI 0.415mg/L；MnSO4 11.15mg/L；H3BO3 3.1mg/L；ZnSO4·7H2O 4.3mg/L；CoCl·6H2O 0.0125mg/L；CuSO4·5H2O 0.0125mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.125mg/L；FeSO4·7H2O 13.9mg/L；Na2EDTA 18.65mg/L；肌醇(Myo‑Inositol)50mg/L；VB1 0.05mg/L；VB6 0.25mg/L；烟酸(Acide Nicotinique)0.25mg/L；NAA 0.6mg/L；蔗糖30g/L；植物凝胶3g/L；pH 5.70；步骤(1)中，接种于所述胚状体诱导培养基的所述小孢子是从经过如下处理的所述待培养小麦的幼穗中分离获得的：将所述待培养小麦的幼穗置于浓度为500mg/L的CuSO4水溶液中4℃处理10天；步骤(1)中，所述诱导培养的条件为28℃避光培养至所述小孢子胚状体的直径为1～2mm时止；步骤(2)中，所述再生培养的条件为23℃，16h光照/8h黑暗培养至所述再生苗长到2～3cm时止；步骤(3)中，所述生根培养的条件为23℃，16h光照/8h黑暗培养3～4周。