[发明专利]一种鳄鱼血去蛋白提取物及其提取方法和应用有效
申请号: | 201510413709.9 | 申请日: | 2015-07-15 |
公开(公告)号: | CN104940237B | 公开(公告)日: | 2019-12-27 |
发明(设计)人: | 符健;邢桂兰;黄裕昌;刘嫱 | 申请(专利权)人: | 符健 |
主分类号: | C07K2/00 | 分类号: | C07K2/00;A61K35/58;A61P9/10;A61P25/00 |
代理公司: | 46002 海口兴南知识产权事务有限公司 | 代理人: | 戴巨龙 |
地址: | 571100 海南省海口市*** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | 本发明公开了鳄鱼血去蛋白提取物及其提取方法和应用,采血及预处理—与水混合后匀浆—灭活血中原有的酶—离心除杂—调节温度、pH值—加入蛋白酶进行水解—灭活—活性炭脱色、离心取上清—过滤、超滤—真空冷冻干燥—即得鳄鱼血去蛋白提取物。该提取物经除去大分子蛋白后,临床拟用给药途径为静脉注射或静脉点滴,有助于人体对其中丰富的氨基酸及小分子多肽的吸收和利用;该去蛋白方法天然、简便、能耗低、节约成本;经KM小鼠尾静脉注射该提取物进行急性毒性试验表明,其毒性极低,安全范围较大。 | ||
搜索关键词: | 去蛋白提取物 提取物 鳄鱼 小鼠尾静脉注射 静脉注射 预处理 急性毒性试验 真空冷冻干燥 蛋白酶 大分子蛋白 活性炭脱色 小分子多肽 给药途径 静脉点滴 离心除杂 水混合 氨基酸 水解 采血 超滤 活血 灭活 匀浆 过滤 能耗 蛋白 节约 吸收 应用 安全 | ||
【主权项】:
1.一种鳄鱼血去蛋白提取物,其特征在于通过以下步骤取得:/n(1)采集血液:通过断头采血的方式,采集泰国暹罗鳄鱼的新鲜血液,室温静置待其凝固;/n(2)匀浆:取凝血块,按重量比为1:5的比例加入注射用水稀释,再用匀浆机以13000r/min的速度充分匀浆;/n(3)超声波粉碎:取匀浆液于冰浴下用超声波粉碎机进行粉碎,25KHz,一共5次,每次处理15min,冷却15min后再进行处理;/n(4)热水浴灭原酶:匀浆液于90℃水浴15min,冷却;/n(5)离心除杂:将匀浆液在4℃以12000r/min离心1h,除去大分子蛋白、脂肪及血细胞碎片杂质,得匀浆上清液;/n(6)双酶水解:匀浆上清液中加入0.5%(g/mL)碱性蛋白酶、0.7%(g/mL)胰蛋白酶和0.1%(g/mL)氯化钙,于50℃-60℃、pH为7.5-8.5的条件下水解2-4h;/n(7)灭活:所得酶解液在90℃下水浴15min灭活,冷却;/n(8)活性炭脱色:用磁力搅拌器于4℃下搅拌,10%(g/mL)活性炭脱色20min,在4℃以12000r/min离心15min得酶解上清液;/n(9)过滤膜:取酶解上清液分别在0.46μm、0.22μm微孔滤膜下过滤,得滤液;/n(10)超滤:将上述滤液经300KDa、100KDa、30KDa、10KDa、1KDa超滤膜下逐级超滤,得超滤液;/n(11)真空冷冻干燥:超滤液在-40℃下预冻4h,用冻干机于-40℃下真空冷冻干燥3d,即得鳄鱼血去蛋白提取物。/n
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