[发明专利]一种活性示踪下肠道免疫调节活性荔枝多糖级分制备方法

摘要

本发明公开了一种活性示踪下肠道免疫调节活性荔枝多糖级分制备方法，对干制的荔枝果肉依次进行超高压酶解辅助热水浸提法提取荔枝粗多糖、脱蛋白处理、透析脱除小分子处理和乙醇分步沉淀处理后，制得具有肠道免疫调节活性的荔枝多糖级分。本发明制备的荔枝多糖具有较高的溶解性和肠道免疫调节活性。

主权项

一种活性示踪下肠道免疫调节活性荔枝多糖级分制备方法，其特征在于，对干制的荔枝果肉依次进行超高压酶解辅助热水浸提法提取荔枝粗多糖、脱蛋白处理、透析脱除小分子处理和乙醇分步沉淀处理后，制得具有肠道免疫调节活性的荔枝多糖级分；超高压酶解辅助热水浸提法提取荔枝粗多糖具体步骤为：S11：干制的荔枝果肉按料液比1：15~20加入蒸馏水，室温下浸泡1~2h后，打浆得均质液并在800~1000rpm条件下搅拌25~35min，向均质液中加入纤维素酶2000~3000U/kg和果胶酶4000~5500U/kg，磁力搅拌的条件下酶解60~80min，将酶解均质液转移至铝箔袋中，排出空气后封口，超高压条件下保压一段时间，卸压后将内容物倒出；S12：将步骤S11处理后的酶解均质液于80~90℃的水浴下浸提4~6h并趁热过滤，滤液于4000~5000rpm条件下离心8~12min，收集上清液备用；S13：对S12中得到的沉淀按料液比1:15~20再次加入蒸馏水并按照S12的浸提步骤重复操作1~2次，收集并合并每次离心后的上清液，于60~70℃旋转蒸发至上清液体积的1/8~1/10，得粗多糖溶液；采用Sevag法进行脱蛋白处理，具体步骤为：向粗多糖溶液中加入1/4粗多糖溶液体积的Sevag试剂，并在转速为250~300rpm条件下震荡20~30min、转速为4000~5000rpm条件下离心8~12min，弃去有机相和蛋白沉淀，于上清液中再次加入1/4上清液体积的Sevag试剂并按前述步骤重复震荡、离心操作共3次，最后将上清液于温度60~70℃旋蒸除去有机试剂；乙醇分步沉淀处理包括如下步骤：S21．浓缩：将透析脱除小分子处理后的粗多糖溶液旋转蒸发浓缩至浓度为5~20mg/ml；S22．分步沉淀：取浓缩后的多糖溶液加入无水乙醇至最终体系的乙醇体积百分比浓度为30%，在温度2~6℃下静置10~12h，弃去沉淀，向上清液中继续补加无水乙醇至体系乙醇体积百分比浓度为50%，在温度为2~6℃下静置10~12h，弃去沉淀，再向上一步骤得到的上清液中补加无水乙醇至体系乙醇体积百分比浓度为80%，在温度2~6℃下静置10~12h，过滤获得沉淀；S23．洗涤：将上述沉淀用乙醇清洗多次，直至沉淀颜色、形态均一，再将沉淀用蒸馏水溶解，真空冷冻干燥得到多糖粉末。