[发明专利]一种油茶子叶节直接再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种油茶子叶节为外植体，通过器官发生途径直接再生植株的方法，属于生物技术领域。包括以下步骤：(1)采用普通油茶的种子为材料培育无菌苗。(2)将子叶节切下接种到不定芽诱导培养基上，经过20‑25d出现不定芽。(3)将不定芽转接到继代增殖培养基中培养20‑30d，增殖系数可达7.0。(4)将增殖的不定芽转接到壮苗培养基中培养20‑25d，苗高可达3‑4cm。(5)将获得的不定芽移入生根培养基，获得完整的试管苗。通过本发明不仅为快速繁殖优良油茶植株提供了一条新途径，而且为油茶遗传转化和分子改良提供技术支撑，为我国油茶产业的健康生产具有重要的意义。

主权项

一种油茶子叶节直接再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)诱导不定芽：在无菌条件下切取0.5cm²的小块油茶膨大的子叶节，接种到培养基为1/2MS+2.0‑3.0mg/L 6‑BA+0‑0.5mg/L IAA+2.0mg/L GA₃诱导不定芽；2)继代培养：将诱导的不定芽切下接种到1/2MS+2.0‑3.0mg/L 6‑BA+0.05‑0.1mg/L IBA+0‑1.0mg/L GA₃的培养基中进行不定芽的继代增殖培养；3)壮苗培养：将增殖培养得到的芽转接到WPM+0.5mg/L NAA+3.0‑5.0mg/LGA₃的培养基中进行壮苗培养；4)生根培养：将壮苗培养获得3‑4cm的苗接到1/2MS+1.0‑2.0mg/LIBA+1.0‑2.0mg/L NAA+35g/L珍珠岩的培养基中进行生根培养；5)炼苗、移栽：将生根后的油茶试管苗先在室内进行移栽前炼苗3‑5d，然后从培养瓶中取出，附带珍珠岩直接移栽到营养杯中，基质为泥炭土：珍珠岩：黄土＝2:1:1，组培苗移栽后保持湿度80％以上，覆盖薄膜并每天喷水1‑2次，两周后即逐步进行正常管理；培养温度为26±1℃，光照培养时光照强度为2100‑2200lx，光照时间12‑14h/d；所述方法中用到的培养基均附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，pH调至5.4‑5.6。