[发明专利]一种果蔗化学消毒组培方法

摘要

本发明涉及一种果蔗化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、种茎处理及诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的果蔗化学消毒组培方法，利用化学试剂达到灭菌或抑菌的目的，在配制培养基的过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了果蔗组培环节；并且操作简单，只要按不同的培养基配方配制即可；实用性强，推广性好，还可以有效降低果蔗的组培成本，一般可降低成本10％以上。

主权项

一种果蔗化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、种茎处理及诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为MS+2.0～5.0mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：MS+0.5～2.0mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；壮苗培养基为MS+0.1～0.5mg/L 6‑BA+1.0‑2.0mg/L KT+0.5～1.0mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+3.0～5.0mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌呤；所述NAA，指〆‑萘乙酸；所述KT，指6－糠氨基嘌呤；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)种茎处理及诱导培养：选择无病虫害果蔗植株，在蔗茎中部取具有饱满蔗芽的双芽茎段，洗净并用800～1000倍稀释的多菌灵浸泡30～40min，清水洗净后放入恒温水浴锅中，50～52℃热水处理25～30min，期间不断搅拌使蔗茎受热均匀；然后，取出种茎用无菌泥炭土覆盖，覆盖厚度以刚露出蔗芽为宜，保持湿润，并在30～37℃和1200～1500lx光照条件下培养；待种茎发芽后，取健壮的植株，从最高肥厚带往下30cm处切下，用体积比为75％的酒精表面消毒，剥离外层叶鞘，取含生长点0.5～1.0cm长的芽尖，接种到诱导培养基上，30d后形成大量的丛生芽；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(4)增殖培养：将外植体诱导培养的丛生芽接种到增殖培养基中，丛生芽逐步发育成不具根的幼苗，每15d转接一次，大量增殖不具根的幼苗；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(5)壮苗培养：将增殖培养的不具根的幼苗接种到壮苗培养基上，20d后获得丛生苗；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(6)生根培养：取壮苗培养出的高度为4～6cm且茎粗不小于0.2cm的丛生苗，将丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，15d后形成完整植株；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；(7)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30～50min，移栽至大棚内的基质中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃。