[发明专利]一种产阿魏酸酯酶的地衣芽孢杆菌及其应用

摘要

本发明公开了一种产阿魏酸酯酶的地衣芽孢杆菌及其应用，该株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)DBM12，保藏编号CGMCC No.8672。本发明的地衣芽孢杆菌不仅对碳源和氮源要求较低、发酵时间短、菌株安全无毒，可以在食品饲料工业中使用；而且遗传稳定性好，操作简单，连续传代10代以上，阿魏酸酯酶的合成能力基本不变。

主权项

一种产阿魏酸酯酶的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)DBM12，已于2014年1月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号：CGMCC No.8672；所述产阿魏酸酯酶的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) DBM12可通过发酵产阿魏酸酯酶并制备阿魏酸，具体包括以下步骤：步骤1，将地衣芽孢杆菌DBM12菌株接种到发酵培养基进行发酵，发酵周期2‑3d，发酵温度35‑40℃，接种量4‑10%，摇床转速160‑200r/min；步骤2，将步骤1的发酵液8000r/min离心20min，上清用0.22μm过滤，收集滤液；步骤3，按硫酸铵饱和度为75%，向步骤2所得滤液中添加硫酸铵，4℃静置12h，8000r/min离心20min，收集沉淀，用20mmol/L，pH6.0磷酸缓冲溶液溶解，上样Sephedex G25分子筛凝胶柱脱盐，以pH6.5的磷酸缓冲液进行洗脱，洗脱速率为15‑20mL/h，得到粗酶液；步骤4，将步骤3所得粗酶液加到麸皮粉中，再加水，调节pH6.5，摇床上震荡频率120r/min，50℃酶解12h，沸水灭酶，离心取上清，即为阿魏酸；所述粗酶液回收得到的粗酶在40℃‑70℃保温100min后酶活力不发生改变。