[发明专利]水解酶法测定不对称二甲基精氨酸及试剂盒

摘要

本发明涉及生物酶法测定不对称二甲基精氨酸(N^G，N^G’dimethyl-L-arginine，asymmetric dimethylarginine，ADMA)及试剂盒开发。具体而言，本发明的生物酶法和试剂盒涉及ADMA在二甲基精氨酸二甲氨基水解酶(dime-thylarginine dimethyl amino hydrolase，DDAH)的作用下，生成等物质量的二甲胺和L-瓜氨酸，L-瓜氨酸利用鸟氨酸甲氨酰转移酶(omithine transcarbamoylase，EC2.1.3.3)和氨甲酰激酶(carbamatekinase，EC2.7.2.2)转化为等物质量的L-鸟氨酸、氨和二氧化碳。通过二乙酰一肟-氨基硫脲比色法或谷氨酸脱氢酶速率法测定氨的含量，进而推知血清中ADMA的浓度。本发明提优点是简化了反应步骤和条件，具有很好的重复性，准确度，灵敏度和稳定性，符合临床检测要求快速、大批量和经济的特点，有利于推广和应用。

主权项

一种测定不对称二甲基精氨酸浓度的方法，样品顺序经过反应体系一、二、三，发生一系列生化反应，最终通过测定吸光值，反应氨的含量，推知样品中ADMA的含量。1)反应体系一为二甲基精氨酸二甲氨基水解酶最适反应体系，作用于ADMA生成二甲胺和L‑瓜氨酸。2)反应体系二为包含鸟氨酸甲氨酰转移酶(omithine transcarbamoylase，)和氨甲酰激酶(carbamatekinase)的最适反应体系，作用于瓜氨酸生成L‑鸟氨酸、氨和二氧化碳。3)反应体系三为包含水杨酸、亚硝基铁氰化钠和次氯酸钠的最适反应体系，作用于氨生成蓝绿色的靛酚蓝，通过着色深浅，比色定量氨。4)可选的，反应体系三也可为包含底物γ‑酮戊二酸、NADPH和谷氨酸脱氢酶的最适反应体系。通过自动分析仪监测NADPH的下降速率，从而确定氨氨含量。