[发明专利]蛭形轮虫分泌物单糖组成的分析方法

摘要

本发明涉及一种蛭形轮虫分泌物单糖组成的分析方法，其是结合傅里叶变换红外光谱、气相色谱及高效液相色谱法对未知物质进行分析的方法，其包括预先对蛭形轮虫分泌物进行提取、纯化，真空冷冻干燥，再通过傅里叶变换红外光谱对其结构做初步鉴定，然后通过气相和高效液相色谱分别进行分析，通过两者谱图比较分析得出其单糖组分。

主权项

一种蛭形轮虫分泌物单糖组分的分析方法，其特征在于该方法的具体步骤为：a.    将经清洁处理过的蛭形轮虫移至无菌去离子水中，使蛭形轮虫密度达到 500～2500 ind/mL，恒温静置30分钟后过滤，并用滤膜过滤去除细菌，收集含有轮虫分泌物的滤液，将该滤液置于真空度等于1.0，温度低于‑51℃的条件下进行冷冻干燥处理，得到分泌物的固体样品；b.    取步骤a所得的固体样品以1∶100的质量比与KBr混合，充分研磨均匀进行傅里叶变换红外光谱扫描，扫描范围：4000～400 cm^‑1；扫描次数：32次；分辨率为4 cm^‑1；说明旋轮虫分泌物的红外光谱表现出一般多糖类物质的特征吸收峰；c.    将蛭形轮虫分泌物进行水解和衍生化；d.    将步骤c所得衍生化和水解后的蛭形轮虫分泌物样品进行气相色谱分析，程序升温为：N2流速为 1～2mL/min，H2流速为30～50mL/min，空气的流速为350～450mL/min，进样温度为200～250℃，柱温为80～100℃，持续1～5min,然后以15℃/min升到300℃，持续6min载气流量10～30mL/min检测器温度为340℃，分流比大于等于100：1；e.    将步骤c所得衍生化和水解后的蛭形轮虫分泌物样品进行高效液相色谱分析，流动相为0.1~1mol/L, pH5~7的乙腈‑磷酸盐缓冲液，流速为1.0~3ml/min ，检测波长为200~300nm ，柱温20~50℃，进样量为20ul。