[发明专利]蛭形轮虫分泌物单糖组成的分析方法

权利要求书

1.一种蛭形轮虫分泌物单糖组分的分析方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.    将经清洁处理过的蛭形轮虫移至无菌去离子水中，使蛭形轮虫密度达到 500～2500 ind/mL，恒温静置30分钟后过滤，并用滤膜过滤去除细菌，收集含有轮虫分泌物的滤液，将该滤液置于真空度等于1.0，温度低于-51℃的条件下进行冷冻干燥处理，得到分泌物的固体样品；

b.    取步骤a所得的固体样品以1∶100的质量比与KBr混合，充分研磨均匀进行傅里叶变换红外光谱扫描，扫描范围：4000～400 cm^-1；扫描次数：32次；分辨率为4 cm^-1；说明旋轮虫分泌物的红外光谱表现出一般多糖类物质的特征吸收峰；

c.    将蛭形轮虫分泌物进行水解和衍生化；

d.    将步骤c所得衍生化和水解后的蛭形轮虫分泌物样品进行气相色谱分析，程序升温为：N2流速为 1～2mL/min，H2流速为30～50mL/min，空气的流速为350～450mL/min，进样温度为200～250℃，柱温为80～100℃，持续1～5min,然后以15℃/min升到300℃，持续6min载气流量10～30mL/min检测器温度为340℃，分流比大于等于100：1；

e.    将步骤c所得衍生化和水解后的蛭形轮虫分泌物样品进行高效液相色谱分析，流动相为0.1~1mol/L, pH5~7的乙腈-磷酸盐缓冲液，流速为1.0~3ml/min ，检测波长为200~300nm ，柱温20~50℃，进样量为20ul。

2.根据权利要求1所述的蛭形轮虫分泌物单糖组分的分析方法，其特征在于所述的蛭形轮虫的清洁处理方法为：将含有蛭形轮虫的样品经目数大于等于400目的滤网和孔径小于或等于0.45μm的滤膜过滤，再用无菌去离子水洗涤截余物。

3.根据权利要求1所述的蛭形轮虫分泌物单糖组分的分析方法，其特征在于所述的步骤c的具体方法为：称取蛭形轮虫分泌物溶于2mol/L三氟乙酸溶液，混合均匀后充入氮气密封，于80～120℃水浴中水解2～12h。