[发明专利]一种用荷叶离褶伞液体发酵产漆酶的培养基及产漆酶方法

摘要

本发明提供了一种用荷叶离褶伞液体发酵产漆酶的培养基及产漆酶方法，所述产酶培养基主要含有葡萄糖12‑28g/L、酪蛋白1‑2 g/L、酵母提取物1‑2 g/L、MgSO42‑3.5 g/L、CuSO40.0025‑0.004 g/L、KH2PO42.91‑5.09 g/L、维生素B10.1 g/L、愈创木酚0.012 g/L，pH 4.86‑6.58，用自来水配制；所述产酶培养基115℃灭菌30min，备用。利用本发明的产酶培养基采用荷叶离褶伞生产漆酶，与已有的食用真菌产漆酶相比漆酶活力高，漆酶活力能够达到829830U/L。工艺简单，而且过程可控，不受外部环境条件限制，适用于工业规模化发酵罐培养生产。其发酵水平达到或超过其他食用菌类真菌发酵水平。

主权项

一种用荷叶离褶伞液体发酵产漆酶方法，其特征在于：包括以下步骤，（1）种子液的培养：取黄豆大小菌株一块接种于固体培养基，所述菌株的供试菌种荷叶离褶伞菌株由甘肃省应用真菌工程实验室提供，保藏号CGMCC1518，菌株号ZY48‑1， 25℃恒温活化培养6d，用0.8cm直径的打孔器取活化后的菌饼3枚， 3枚菌饼接种到装有80mL液体培养基的250mL三角瓶中，25℃、120r/min震荡培养6d，即 得种子液；其中所述固体培养基的配方为：马铃薯200g、麸皮30g、磷酸二氢钾1g、蛋白胨3g、葡萄糖20g、琼脂16g、水1000mL、pH值自然，115℃灭菌30min所得；其中所述液体培养基的配方为：马铃薯200g、麸皮30g、磷酸二氢钾1g、蛋白胨3g、葡萄糖20g、水1000mL、pH值自然，115℃灭菌30min所得；（2）发酵培养：吸取5mL种子液加入装有80mL产漆酶培养基的250mL三角瓶中，25℃、120r/min震荡培养9d，得到含有漆酶的荷叶离褶伞液体发酵培养液；所述的产漆酶培养基组成以克/升计：葡萄糖20.09、酪蛋白1.5、酵母提取物1.5、MgSO4 3、CuSO40.00375、KH2PO43.97、VB10.1、愈创木酚0.012，用自来水配制、pH4.98、115℃灭菌30min；（3）粗酶液制备：过滤步骤（2）得到的荷叶离褶伞液体发酵培养液，所得滤液在15000r/min条件下离心10min，所得上清液即为漆酶粗酶液。