[发明专利]一种新的新金色分枝杆菌表达体系及其在转化植物甾醇合成ADD中的应用有效
| 申请号： | 201510143997.0 | 申请日： | 2015-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN104830888B | 公开（公告）日： | 2018-05-01 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;许正宏;张乐乐;张显;徐美娟;杨套伟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/53;C12N1/21;C12P33/16;C12P33/02;C12R1/32 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新金色分枝杆菌表达载体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明的新金色分枝杆菌表达载体pMTac‑2，可用于在新金色分枝杆菌高效表达蛋白，适用于分枝杆菌代谢产物的研究和生产。利用pMTac‑2在新金色分枝杆菌中过量表达KSDD，使重组菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd胞内的KSDD活性比原始菌提高15.12倍。以30g/L植物甾醇为底物，5L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd的ADD产量达到15g/L以上，为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。因此，该表达体系能够有效利用于新金色分枝杆菌的遗传改造。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 金色 分枝杆菌 表达 体系 及其 转化 植物 合成 add 中的 应用 | ||
【主权项】：
一种利用构建的重组分枝杆菌发酵植物甾醇合成ADD的方法，其特征是：将重组分枝杆菌菌株活化48h后以接种到含30g/L植物甾醇的发酵罐中，10％接种量，30℃，400r/min，1vvm通气量，pH为维持在7.0‑7.5；发酵72h开始流加葡萄糖，维持葡萄糖浓度在4‑5g/L；其中重组分枝杆菌为通过PCR技术获得新金色分枝杆菌3‑甾酮‑△1‑脱氢酶编码基因ksdd，并连接到pMTac‑2上，获得重组载体pMTac‑2‑ksdd；将重组载体分别电转化至M.neoaurum JC‑12中，获得KSDD加强表达的重组分枝杆菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd；其中pMTac‑2的核酸序列如SEQ ID NO:2所示。
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