[发明专利]一种快速选育土霉素菌种的方法

摘要

一种快速选育土霉素菌种的方法，包括以下步骤：a、试管斜面陪养，b、孢子悬液的制备，c、分离培养，d、发酵培养，e、菌株复试。通过将分离培养得到的单菌落直接接种到发酵培养基中发酵培养，不仅筛选得到的土霉素的效价高，更有意义是将单菌落效价验证时间缩短为48-50h，大大提高了工作效率。

主权项

一种快速选育土霉素菌种的方法，其特征在于：包括以下步骤：a.试管斜面培养：将土霉素生产菌株砂土孢子接种于试管斜面培养基中，在温度37.0±0.5℃，湿度40％‑60％的条件下培养3‑5天，得到斜面孢子；b.孢子悬液制备：向步骤a试管斜面培养基中加入无菌水，将步骤a得到的斜面孢子刮下，混匀，制成孢子悬液，用血球计数板计数，使孢子浓度为10¹²‑10¹⁴个/mL；c.分离培养：将步骤b所得的孢子悬液用无菌水稀释至10¹‑10⁷倍，稀释液涂布在分离培养基上，于温度37.0±0.5℃，湿度40％‑60％的条件下暗培养3‑5天，培养时第一天正置，第二天起倒置培养；d.发酵培养：在分离培养基上挑取直径在5mm以上的单菌落接种到25mL发酵培养基中，于32.0±0.5℃，湿度为40‑60％，转速为200‑220rpm条件下震荡培养48‑50h，生长到周期后检测发酵液中土霉素含量，选高于效价500U/mL的菌株进行砂土干燥保藏；e.菌株复试：取步骤d沙土干燥保藏的菌株转接试管斜面培养基，于37.0±0.5℃，40％‑60％湿度条件下培养3‑5天，得斜面孢子，将所得的斜面孢子转接至种子培养基中，于30.0±0.5℃，220rpm条件下震荡培养24‑30h，将培养好的种液转接至复试用发酵培养基中，于30.0±0.5℃，200‑220rpm条件下震荡培养5‑7天，取样检测效价。