[发明专利]一种人工角膜的制备方法

摘要

本发明公开了一种人工角膜的制备方法，包括如下步骤：(1)收集适龄猪眼球；(2)刮除上述猪眼球的角膜上皮细胞和角膜内皮细胞，保留前弹力层，使用板层刀制备板层角膜，钻取指定大小角膜片；(3)将步骤(2)获得的角膜片置于液氮8～35分钟，取出后在常温常压下将角膜片缓慢复温至室温，重复4～12次；(4)将步骤(3)冻融处理后的角膜片置于生理盐水中进行超声波清洗，超声工作频率20～250kHz，超声时间15～65分钟；(5)将超声处理后的角磨片置于缓冲体系中用核酸内切酶酶解角膜基质细胞DNA，即得所述人工角膜。本发明的制备方法制备的人工角膜的天然胶原纤维之间的空隙有利于诱导受体角膜细胞的生长和神经纤维的生长，促进供体角膜修复和重建。

主权项

1.一种人工角膜的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)选料：收集4～12月龄猪眼球；(2)预处理：刮除上述猪眼球的角膜上皮细胞和角膜内皮细胞，保留完整的角膜前弹力层，钻取指定大小角膜片；(3)冻融：在常温常压下，将步骤(2)获得的角膜片置于液氮8～35分钟，取出后在常温常压下将角膜片缓慢复温至室温，重复4～12次；(4)超声：将步骤(3)冻融处理后的角膜片置于生理盐水中进行常温常压下的超声波清洗，超声工作频率20～250kHz，超声时间15～65分钟；(5)酶降解：在常温常压下，将超声处理后的角磨片置于缓冲液中用核酸内切酶酶解角膜基质细胞DNA，即得所述人工角膜，该缓冲液的以培养液为溶剂，还包括0.1～0.5％的非必需氨基酸、2～3％的酸碱调节剂、10～60mol/L的无机阳离子和10～60mol/L的无机阴离子，pH值为7.0～7.5，渗透压为330～390mOsm/L，核酸内切酶的浓度为5～55μg/mL，酶解时间20～230分钟，核酸内切酶为限制性核酸酶I或限制性核酸酶II，所述培养液为SFM，MEM，DMEM，BME或HAMF12，所述无机阳离子为钠离子、锂离子、铝离子、钙离子和镁离子中的至少一种，所述无机阴离子为氯离子、氢氧根离子、碳酸根离子、磷酸根离子、磷酸氢根离子和硫酸根离子的至少一种，所述非必需氨基酸为甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸、半胱氨酸、精氨酸和组氨酸中的至少一种。