[发明专利]一种羊骨髓间充质干细胞的分离与培养方法在审
| 申请号： | 201510074090.3 | 申请日： | 2015-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN104630143A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;陈洁鸿;罗二梅 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 广州圣理华知识产权代理有限公司 44302 | 代理人： | 顿海舟;陈业胜 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种羊骨髓间充质干细胞的分离与培养方法，包括(1)获取羊骨髓；(2)PBS洗涤，ficoll密度梯度离心法分离单核核细胞，接种到完全培养基中贴壁培养，完全培养基为含有10％FBS的DMEM/F12培养基(3)接种18～24h后，用含5～10μg/L EGF和50～100mg/L NEAA的完全培养基进行培养。本发明通过改进常规的密度梯度离心法，再利用改进的培养体系对分离得到的BMSCs进行了高效扩增，成功得到了具有自我更新及分化潜能的BMSCs。利用本发明方法可建立起一种羊BMSCs的快速稳定的分离方法及和高效的扩增体系。 | ||
| 搜索关键词： | 种羊 骨髓 间充质 干细胞 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种羊骨髓间充质干细胞的分离与培养方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)获取羊骨髓(2)将离心管中的骨髓用PBS洗涤后，加入等体积的完全培养基重悬细胞，另取一离心管加入等体积的Ficoll分离液，将骨髓细胞悬液缓慢加入到Ficoll分离液上层，离心后吸取单个核细胞层，用PBS清洗，用完全培养基重悬细胞后，接种到完全培养基中贴壁培养；(3)接种18～24h后，弃去未贴壁的细胞及培养基，用PBS清洗后，加入含5～10μg/L EGF和50～100mg/L NEAA的完全培养基继续培养，即可得到羊骨髓间充质干细胞；完全培养基为含有10％FBS的DMEM/F12培养基，百分数为体积百分数。
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