[发明专利]一种检测体液中碱性磷酸酶的方法

摘要

本发明涉及一种检测体液中碱性磷酸酶的方法。所述方法以三磷酸腺苷(ATP)作为碱性磷酸酶(ALP)的催化底物，该三磷酸腺苷在碱性磷酸酶的催化下转化为腺苷，由于在有三磷酸腺苷提供能量的情况下，荧光素酶可以催化荧光素发光，并且发光强度和ATP的含量成正比。样品中ALP酶越多，消耗的ATP越多，导致生物发光的改变量越大。因此通过测量该生物发学的发光强度的改变量可计算出碱性磷酸酶的含量。通过本发明的方法能检测到10‑15M的碱性磷酸酶，与传统方法相比，该方法灵敏度高、抗干扰能力强，操作简单，检测仪器携带方便，适合临床诊断的分析方法；除以上优势外，还可以大大缩短检测时间和降低检测成本。

主权项

一种检测体液中碱性磷酸酶的方法，其特征在于，采用生物发光法对体液样本中的碱性磷酸酶含量进行检测；所述方法包括以下步骤：(1)采用比饱和磁化强度为70‑90emu/g，粒径在100‑2200nm的超顺纳米磁珠，通过共价偶联的方式将识别碱性磷酸酶的抗体偶联在超顺纳米磁珠的表面，制备成超顺纳米免疫磁珠；(2)将步骤(1)得到的免疫磁珠置于待测分析液中，形成抗原‑抗体免疫磁珠复合物；(3)将步骤(2)得到的复合物在室温下涡流震荡反应20min，然后进行磁分离，从而实现碱性磷酸酶的富集，得到免疫磁珠‑碱性磷酸酶复合物；(4)向步骤(3)得到的免疫磁珠‑碱性磷酸酶复合物中加入浓度为1nM‑100μM生物三磷酸腺苷溶液，得到的 混合液在20‑37℃震荡反应15‑30min；(5)向步骤(4)的混合液中加入生物发光试剂，用三磷酸腺苷检测仪测量生物发光值，根据所述的生物发光值的改变量计算碱性磷酸酶的含量。