[发明专利]枯草芽孢杆菌的高丝氨酸脱氢酶基因灭活方法在审
| 申请号： | 201510052898.1 | 申请日： | 2015-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN104630253A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 王升平;李丽立;张彬;范觉鑫;蒋国礼;刘刚;刘志强 | 申请（专利权）人： | 中国科学院亚热带农业生态研究所 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/21 |
| 代理公司： | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人： | 何为;袁颖华 |
| 地址： | 410125 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 一种枯草芽孢杆菌的高丝氨酸脱氢酶基因灭活方法，该方法包括以下步骤：构建用于同源重组的PCR产物的质粒，该重组质粒由pMD18-T载体、卡纳霉素抗性基因和高丝氨酸脱氢酶基因组成，其中，该同源重组的DNA片段含有用于替代待敲除基因的高丝氨酸脱氢酶基因以及在高丝氨酸脱氢酶基因中间部位插入的卡纳霉素抗性基因；从重组质粒上PCR扩增高丝氨酸脱氢酶基因以及在高丝氨酸脱氢酶基因中间部位插入的卡纳霉素抗性基因，使PCR产物单链化，通过电转化将所述单链PCR产物转化至枯草芽孢杆菌感受态细胞，得到转化子，并筛选出阳性转化子，即高丝氨酸脱氢酶基因灭活的突变株。本方法相对现有将高丝氨酸脱氢酶重组质粒转化枯草芽孢杆菌感受态细胞的技术，更为简单、省时。 | ||
| 搜索关键词： | 枯草 芽孢 杆菌 丝氨酸 脱氢酶 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种枯草芽孢杆菌的高丝氨酸脱氢酶基因灭活方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：a、构建用于同源重组的PCR产物的质粒，该重组质粒由pMD18‑T载体、卡纳霉素抗性基因和高丝氨酸脱氢酶基因组成，其中，该同源重组的DNA片段含有用于替代待灭活基因的高丝氨酸脱氢酶基因以及在高丝氨酸脱氢酶基因中间部位插入的卡纳霉素抗性基因；b、从重组质粒上PCR扩增高丝氨酸脱氢酶基因以及在高丝氨酸脱氢酶基因中间部位插入的卡纳霉素抗性基因，使PCR产物单链化，将所述单链PCR产物转化至枯草芽孢杆菌感受态细胞，得到转化子，并筛选出阳性转化子，即高丝氨酸脱氢酶基因灭活的突变株。
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