[发明专利]一种同时测定半夏中6种有机酸含量的HPLC方法

摘要

本发明涉及一种同时测定半夏中6种有机酸含量的方法，该方法包括以下步骤(1)样品溶液制备(2)对照品溶液制备(3)高效液相色谱测定取对照品溶液和样品溶液在以下色谱条件下进行测定分析，色谱柱为GL InterSustain‑C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为磷酸调节pH＝2.0的0.03mol·L‑1(NH4)H2PO4缓冲液和甲醇，体积比为97∶3，流速为0.8mL·min‑1，柱温30℃，检测波长为210nm。在该方法条件下，半夏中草酸、甲酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸同时得到了有效分离，且方法学结果均符合分析测定要求。该方法相比以前电位滴定法测定总有机酸的含量更为明确和客观，能有效、快速的测定半夏中6种有机酸的含量，可更全面、更准确的用于半夏药材的质量控制。

主权项

一种同时测定半夏中6种有机酸含量的HPLC方法，其特征在于以下步骤：(1)样品溶液的制备：称取干燥的半夏药材粉末2.0g，精密称定，加入40mL水，称定重量，超声，300W，25kHz，提取2次，每次2h，放至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，提取液用砂芯布什漏斗过滤，合并滤液置100mL容量瓶中，加水定容，精密量取滤液20mL于小烧杯中，滴加氨水调pH在11.5‑12范围内，每次用提取液3倍量的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，收集碱水液，再滴加磷酸调pH在2.0‑2.5范围内，每次用碱水液3倍量的乙酸乙酯萃取，共萃取5次，收集乙酸乙酯，旋转蒸发挥干，加超纯水溶解并定容至25mL，用0.22μm滤膜滤过，取续滤液，即为样品溶液；(2)对照品溶液的制备：分别精密称取草酸、甲酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸对照品适量，加水溶解，制得含有草酸、甲酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸的混合对照品溶液；(3)高效液相色谱测定：将对照品溶液和样品溶液进行高效液相色谱测定，色谱柱为GL InterSustain‑C18，流动相为磷酸调节pH为2.0的0.03mol·L‑1(NH4)H2PO4缓冲液和甲醇，体积比为97∶3，流速0.8mL·min‑1，柱温30℃，检测波长210nm，对照品溶液和样品溶液各进样20μL，采用标准曲线法定量，色谱图记录与处理由工作站完成，理论塔板数按草酸峰计算不低于3000。