[发明专利]表达猪pCD163的细胞系、其制备方法及应用有效
| 申请号： | 201510027577.6 | 申请日： | 2015-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN104593331B | 公开（公告）日： | 2017-07-28 |
| 发明（设计）人： | 杜以军;王金宝;丛晓燕;陈蕾;齐静;孙文博;吴家强;陈智;于江;郭立辉;任素芳 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N7/00;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所37218 | 代理人： | 刘丽 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术中基因表达领域，特别涉及一种表达猪pCD163的细胞系，通过RT‑PCR扩增获得pCD163受体基因，将其插入真核表达载体pCI‑neo中，构建真核表达质粒pCI‑pCD163，将真核表达质粒pCI‑pCD163转染MARC‑145细胞，通过G418进行抗性筛选，获得单克隆细胞并扩大培养即得。所述的细胞系在临床分离PRRSV病毒和生产PRRSV疫苗中的应用。本发明构建的pCD163‑MARC细胞系可以在病毒滴度较低的情况下快速、高效地增殖PRRSV，突破了PRRSV增殖率低的局限性；对临床样品的PRRSV分离率高，病毒增殖滴度高，更加适合于疫苗生产。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 pcd163 细胞系 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种表达猪pCD163的细胞系，其特征是通过以下步骤得到的：通过RT‑PCR扩增获得pCD163受体基因，将其插入真核表达载体pCI‑neo中，构建真核表达质粒pCI‑pCD163，将真核表达质粒pCI‑pCD163转染MARC‑145细胞，通过G418进行抗性筛选，获得单克隆细胞并扩大培养即得;RT‑PCR扩增获得pCD163受体基因中使用的引物序列如下：pCD163‑Fwd:5’‑ATACTCGAGCCACCATGGACAAACTCAGAATGGTGCTAC‑3’，pCD163‑Rev: 5’‑ATAGCGGCCGCAAGCTTATCATTGTACTTCAGAG‑3’。
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