[发明专利]适用于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法有效
| 申请号： | 201510019776.2 | 申请日： | 2015-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN104498479A | 公开（公告）日： | 2015-04-08 |
| 发明（设计）人： | 董志国;陈百尧;张庆起;赵帅;伏光辉;安健;张立祥 | 申请（专利权）人： | 淮海工学院;连云港市高公岛黄窝捕捞养殖公司;连云港赣榆佳信水产开发有限公司;连云港市海洋与水产科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 连云港润知专利代理事务所32255 | 代理人： | 刘喜莲 |
| 地址： | 222000 江苏省连云港市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明是一种刺参免提DNA的?PCR快速扩增方法，其步骤是将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液0.02-1?L入200?L?PCR管中，置于冰浴备用；当不能立即PCR时将其置-20℃下保存，1周内有效；一步法PCR以上述PCR管的体液为模板，进行25?L体系下的PCR扩增反应条件为普通PCR条件，扩增程序为94?℃预变性4?min；94?℃变性40?s，50-60?℃退火40?s，72?℃延伸40?s，共35个循环；72?℃延伸6?min，4?℃保存；再按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。本发明方法设计简便合理，可操作性强，无需经过DNA抽提过程，即可获得理想的扩增效果。 | ||
| 搜索关键词： | 适用于 刺参 免提 dna pcr 快速 扩增 方法 | ||
【主权项】：
一种刺参免提DNA的?PCR快速扩增方法，其特征在于，其步骤如下，取体液：将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液0.02?1?L入200?L?PCR管中，置于冰浴备用；当不能立即PCR时将其置?20℃下保存，1周内有效；一步法PCR：以上述PCR管的体液为模板，进行25?L体系下的PCR扩增：25?L体系：体液?????????????0.02?1?L2×Taq?PCR?MasterMix?????????12.5?L引物??2?L，上下游混合引物，浓度均为2.5?mol/L；ddH2O???????????????????补足至25?L反应条件?：普通PCR条件，扩增程序为：94?℃预变性4?min；94?℃变性40?s，50?60?℃退火40?s，72?℃延伸40?s，共35个循环；72?℃延伸6?min，4?℃保存；（3）PCR产物检测：按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。
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