[发明专利]从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法有效
| 申请号： | 201510019329.7 | 申请日： | 2015-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN104558155B | 公开（公告）日： | 2016-11-23 |
| 发明（设计）人： | 李光飞;陶玲;徐敏;苏少博 | 申请（专利权）人： | 山西瑞亚力科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K14/47;C07K1/18;C07K1/20 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 048100 山西省晋城市*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明适用于蛋白纯化技术领域，提供了一种从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法。该方法包括下述步骤：取血浆，使用阴离子交换柱对其进行第一次层析纯化处理，获得PA‑RBP复合物初体；使用疏水柱对所述PA‑RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理，得到纯化后的PA‑RBP复合物；将所述纯化后的PA‑RBP复合物进行解离处理，得到含有PA和RBP的混合样品；使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理，分离得到PA和RBP。 | ||
| 搜索关键词： | 血浆 纯化 白蛋白 视黄醇 结合 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，包括下述步骤：取血浆，使用阴离子交换柱对其进行第一次层析纯化处理，获得PA‑RBP复合物初体，所述阴离子交换柱采用UNOsphere Q填料的阴离子交换层析柱，其中，所述第一次层析纯化处理的洗脱体系采用Tris‑HCl浓度为20mM、NaCl浓度为500mM、且PH9.0的洗脱液；使用疏水柱对所述PA‑RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理，得到纯化后的PA‑RBP复合物，所述疏水柱采用Phenyl sepharose FF/HS填料的疏水层析柱，其中，所述第二次层析纯化处理的洗脱体系采用Na2HPO4‑NaH2PO4浓度为50mM、(NH4)2SO4浓度为0.5M、且PH6.0的洗脱液；将所述纯化后的PA‑RBP复合物进行解离处理，得到含有PA和RBP的混合样品；使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理，分离得到PA和RBP，所述疏水柱采用Phenyl sepharose FF/HS填料的疏水层析柱，其中，所述第三次层析纯化处理分别先后采用下述洗脱液A和洗脱液B作为洗脱体系，洗脱液A：Na2HPO4‑NaH2PO4浓度为50mM、(NH4)2SO4浓度为0.5M、且PH6.0；洗脱液B：Na2HPO4‑NaH2PO4浓度为50mM、且PH6.0；所述第二次层析纯化处理、所述第三次层析纯化处理的层析流速为1.5‑3ml/min。
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