[发明专利]从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法

权利要求书

1.一种从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，包括下述步骤：

取血浆，使用阴离子交换柱对其进行第一次层析纯化处理，获得PA-RBP复合物初体；

使用疏水柱对所述PA-RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理，得到纯化后的PA-RBP复合物；

将所述纯化后的PA-RBP复合物进行解离处理，得到含有PA和RBP的混合样品；

使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理，分离得到PA和RBP。

2.如权利要求1所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，将所述纯化后的PA-RBP复合物进行解离处理的方法为：在所述纯化后的PA-RBP复合物中加入尿素，使得所述尿素的终浓度为4-6mol/L。

3.如权利要求1所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，在使用离子交换层析柱对血浆进行第一次层析纯化处理的步骤中，所述阴离子交换柱的填料和所述样品的体积比为1:(1-1.2)。

4.如权利要求1所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，使用阴离子交换柱对其进行第一次层析纯化处理的步骤中，所述阴离子交换柱采用UNOsphere Q填料的阴离子交换层析柱。

5.如权利要求1、4任一所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，在使用离子交换层析柱对血浆进行第一次层析纯化处理的步骤中，所述第一次层析纯化处理的洗脱体系采用Tris-HCl浓度为20mM、NaCl浓度为500mM、且PH9.0的洗脱液。

6.如权利要求1所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，在使用疏水柱对所述PA-RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理的步骤中，所述疏水柱采用Phenyl sepharose FF/HS填料的疏水层析柱。

7.如权利要求1、6任一所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，在使用疏水柱对所述PA-RBP复合物初体进行第二次层析纯化处理的步骤中，所述第二次层析纯化处理的洗脱体系采用Na₂HPO₄-NaH₂PO₄浓度为50mM、(NH₄)₂SO₄浓度为0.5M、且PH6.0的洗脱液。

8.如权利要求1所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，在使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理的步骤中，所述疏水柱采用Phenyl sepharose FF/HS填料的疏水层析柱。

9.如权利要求1、8任一所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，在使用疏水柱对将所述混合样品进行第三次层析纯化处理的步骤中，所述第三次层析纯化处理分别先后采用下述洗脱液A和洗脱液B作为洗脱体系，

洗脱液A：Na₂HPO₄-NaH₂PO₄浓度为50mM、(NH₄)₂SO₄浓度为0.5M、且PH6.0；

洗脱液B：Na₂HPO₄-NaH₂PO₄浓度为50mM、且PH6.0。

10.如权利要求1所述的从血浆中纯化前白蛋白和视黄醇结合蛋白的方法，其特征在于，所述第二次层析纯化处理、所述第三次层析纯化处理的层析流速为1.5-3ml/min。