[发明专利]使用其中进行了调控使赖氨酰-tRNA合成酶被表达或不被表达的细胞或球状聚集的细胞的培养筛选癌症转移抑制剂的方法

摘要

本发明涉及一种用于通过分析三维胶原蛋白凝胶环境中培养的癌细胞系中的赖氨酰-tRNA合成酶(KRS)的活性来筛选癌转移抑制剂的方法，以及涉及一种用于监测癌细胞从聚集的癌细胞的播散和癌细胞的上皮-间充质转化、迁移、浸润和转移的方法。具体而言，证实了在使用包括HCT116细胞系的各种结肠直肠癌细胞构建其中已进行了调控使KRS被表达或不被表达的细胞系或球状聚集的细胞系，然后在二维环境中培养的情况下，抑制KRS表达的细胞系中诱导了不完全上皮-间充质转化表型(不完全ECM表型)，且KRS表达的抑制抑制了细胞-细胞外基质(ECM)粘附和细胞-ECM信号传导活性。另外，证实了在所构建的球状体细胞系是在液态环境或三维胶原蛋白凝胶培养环境中培养的情况下，KRS表达的抑制将细胞诱导为间充质细胞，但未能达到细胞-细胞粘附的分解；抑制了细胞-ECM粘附和相关的信号传导活性，引起对细胞从三维胶原蛋白凝胶培养环境中培养的球状体细胞播散的抑制；以及未能通过细胞微环境中存在的TGFβ1诱导细胞播散。因此，本发明可以用作一种用于筛选癌转移抑制剂的方法和一种用于监测癌细胞的迁移、浸润和转移的方法，并且作为在药物研发要求的临床前测试时能创造低成本、高效率附加值的筛选方法之一是有用的。

主权项

一种用于筛选癌转移抑制剂的方法，所述方法包括以下步骤：1)在三维环境中或在由细胞外基质包围的环境中培养其中进行调控使赖氨酰‑tRNA合成酶(KRS)被表达或不被表达的癌细胞系或聚集的癌细胞；2)用步骤1)的所述癌细胞系或所述聚集的癌细胞处理样品；3)分析步骤2)的所述癌细胞系或所述聚集的癌细胞中的KRS的活性；以及4)选择步骤3)中已确定能抑制KRS活性的所述样品。