[发明专利]一种表达纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白构建纤维素酶高产菌株的方法有效
| 申请号： | 201410824320.9 | 申请日： | 2014-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN104480139B | 公开（公告）日： | 2017-12-15 |
| 发明（设计）人： | 薛栋升 | 申请（专利权）人： | 湖北工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N1/15;C12R1/685 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)42222 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430068 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种表达纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白构建纤维素酶高产菌株的方法，属于酶工程领域。该方法为通过同源重组和基因工程技术将具有纤维素外切酶和内切酶双活性蛋白的编码基因整合到黑曲霉热激蛋白基因的位置。首先合成合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的同源重组片段，用SalI酶切该重组片段和pWM1质粒再连接转化DH5α得到同源重组质粒；用该同源重组质粒转化农杆菌，通过农杆菌介导转化得到纤维素酶高产黑曲霉菌株。本发明利用热激表达实现了通过提高温度大幅度增加目的蛋白的表达，从而更显著的提高纤维素外切酶和内切酶的活性，增加纤维素酶的酶活。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 纤维素 外切 内切酶双 活性 蛋白 构建 纤维素酶 高产 菌株 方法 | ||
【主权项】：
一种纤维素酶高产黑曲霉菌株，其特征在于：通过包括如下步骤的构建方法得到：(1)合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的同源重组片段，用SalI酶切；将pWM1质粒也用SalI酶切；将酶切后的重组片段和质粒通过DNA连接酶连接，并转化DH5α得到同源重组质粒；(2)用同源重组质粒转化农杆菌；(3)通过农杆菌介导转化黑曲霉ATCC10582得到目的菌株。
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